应激诱导对牛卵细胞成熟和凋亡的影响及金属硫蛋白基因的初步研究.pdfVIP

摘 要 细胞凋亡是细胞清除由于自身或外界环境不良环境影响产生的不良细胞的主要途径之一。体 外培养的卵母细胞易受一些环境及外源刺激，如氧化剂，机械刺激，重金属，生物类的毒素，紫 外线等产生一一系列的刺激性反应，包括细胞转导路径，基因的表达和蛋白的合成，细胞的分裂增 殖及凋亡，甚至是坏死；金属硫蛋白对细胞有抗氧化清除自由基的功效，对细胞的凋亡起抑制作 用。由于环境的影响，细胞会不可避免的受到外界不良环境的影响，所以通过体外培养卵母细胞， 外源性的添加应激诱导的因素从而进一步探讨其对卵母细胞发育和凋亡的影响，从而可以趋利避 害，提高卵母细胞的成熟率，有利于体外受精，提高早期胚胎的发育率和附植率，降低不孕不育 的比率或胚胎畸变率及流产率。 本研究以牛卵母细胞为试验材料，应用共聚焦显微镜、Annexin 影响及构建金属硫蛋白基因的过表达载体得出以下结论： 的毒性作用摹剂量效应，随着其浓度的增加，卵母细胞凋亡加剧，在CdCl2浓度达到1．6“∥ml和 的变化。 2．本实验首次研究紫外线对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响。实验表明，紫外线对卵母细 胞的作用呈时间效应，随着其照射的增加，卵母细胞凋亡加剧，在照射时问达到20min和30min 的时候，与对照组相比卵母细胞的凋‘率，成熟率都有明显的差异(P0．05)；随着照射时问的 延长，其Ca2+荧光强度及线粒体膜电位的荧光强度增强，Bcl．2／Bax的比值发生较为明显的变化。 3．本实验首次研究H202对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响。实验表明，H202对卵母细胞 荧光强度、线粒体膜电位的荧光强度及Bc!．2／Bax的比值都会发生较为明显的变化。 4．本实验初步构建了金属硫蛋白基因的过表达载体，为后续的转染实验及MT基因的表达的 检测做进一步的准备。 关键词：牛，卵母细胞，应激诱导，金属硫蛋白基囚，凋亡 Abstract Cell isoneofthemain for cellstoremovebadcellswhich apoptosis ways earlyembryonic itsadverseorexternal environment．invitro producedby Oocytes is affectedsomeofthe easily by environmentaland as stimuli，such exogenous oxidants，mechanical metals， stimulation，heavy aseriesof celltransduction biologicaltoxins，ultraviolet，which produce irritation，including path，gene and divisionandand even expressionproteinsynthesis，cell proliferation，cell necrosis； apoptosis，or Metallothioneinhastheeffectsoncellstoclearfree radicalsandinhibitthecells tothe