徐淮山羊h-fbp基因克隆及转基因小鼠和转基因羊的制备.pdfVIP

徐淮山羊H．FABP基因克隆及转基因小鼠 和转基因羊的制备 研究生： 阴彦辉 导师：李碧春 专业：动物遗传育种与繁殖 (扬州大学动物科学与技术学院，扬州225009) 中文摘要 约为12．16KDa，该蛋白家族属于载脂蛋白超家族(Lipocalin 转运蛋白。该蛋白家族最早是1971年美国加州大学的Ocker等在研究大鼠的脂肪酸吸收的 调节时，在小肠肠粘膜发现。到目前为止已经发现十一种亚型，根据其主要分布器官和组织 FABP)、表皮型(EpidermalFABP)、回肠型(I 脂肪细胞型(Adipocyte，A—FABP)、脑型(Brain leal FABP，T—FABP) FABP)、睾丸型(testis FABP)、髓磷脂型(MyelinFABP)、’肾型(Renal Retinoid 脂肪酸结合蛋白以及细胞视黄醇结合蛋白(Cell Binding RetinoidAcid 醇酸结合蛋白(Cell Binding 源性。该蛋白家族占细胞内可溶性蛋白总量的3％．8％。主要参与细胞内脂肪酸的运输，可 将脂肪酸从细胞膜上运送到甘油三酯和磷脂合成的位点，进而调节脂肪酸代谢。 acid 心脏型脂肪酸结合蛋白(heartfatty binding 族中分布最广泛，作用也最为重要。它主要存在于3种细胞之中：(1)D氧化速率高的细 胞(如心肌、骨骼肌细胞)；(2)脂肪代谢强度高、尤其是类固醇合成旺盛的细胞(如内分泌 系统的肾上腺皮质细胞、泌乳的乳腺)；(3)内胚层起源的细胞。在心肌中含量最为丰富， 约占心脏全部可溶性蛋白的4％．8％。其主要作用是防止细胞内堆积游离脂肪酸。该蛋白是 一种可溶性细胞质蛋白，分子量为14．15KDa。H．FABP是一种酸性蛋白质，在不同的物种 之间具有较强的保守性。人H．FABP的一级结构由132个氨基酸残基组成，牛、羊、野猪、 野猪、驴及斑马鱼进行同源性比较，可知该基因在不同的物种之间具有较高的保守性。该 蛋白无信号肽，无糖基化位点，但是存在8个磷酸化位点。通过GFP示综蛋白和间接免疫 荧光双重检测，结果证实徐淮山羊H．FABP蛋白在细胞质中表达。 通过睾丸注射法，将携带有徐淮山羊H．FABP的重组载体转入雄性小鼠睾丸内，然后 的阳性个体。将GO代阳性个体自交获得G1代小鼠，经过DNA和蛋白水平检测，最终获 并测定其肌间脂肪含量，结果显示阳性个体较阴性个体肌间脂肪含量显著偏高。结果说明： 外源基因的生物学功能在小鼠水平得到充分发挥。 利用显微注射法制备转基因羊，将徐淮山羊H．FABP基因转入波尔山羊成纤维细胞中， 经过G418获得阳性细胞系。将阳性细胞作为核供体注射入成熟去核卵母细胞中，再将重 组胚胎植入受体母羊子宫中，并获得4例阳性流产胎儿和一只活体阳性羔羊，阳性率为 83．33％。 参照睾丸注射制备转基因小鼠的基本思路，采用睾丸注射制各转基因羊。获得17只 F1代个体，3只阳性个体，阳性率为17．65％。 关键词： 徐淮山羊，H．FABP，睾丸注射，显微注射，转基因羊，转基因小鼠 XuhuaiH·-FABP and of goat genecloning preparation miceand transgenictransgenicgoat