紫色达利菊提取合单宁对大肠杆菌和瘤胃氮代谢以及瘤胃微生物的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 美草原上的一种豆科植物。紫色达利菊含有较高的缩合单宁并具有极强的抗致病性大肠杆菌 的能力。但关于其缩合单宁对大肠杆菌的抑菌活性及可能机制，是否具有保护植物蛋白过瘤 胃的作用以及对瘤胃微生物的影响并不清楚。因此，设计三个实验来研究紫色达利菊缩合单 宁对反刍动物的影响： 实验一、紫色达利菊所含缩合单宁对肉牛后肠大肠杆菌抑制能力及其作用机理。 在致病性大肠杆菌0157：H7的体外培养基中加入十一种不同植物缩合单宁(添加量： 400btg／m1)，结果发现仅紫色达利菊所含缩合单宁表现出较强的抗致病性大肠杆菌0157：H7 25922) 生物活性。同时，在厌氧条件下添加200p鲥血该缩合单宁表现出对大肠杆菌(ATCC 的抑制作用。穿透电子显微镜观察发现大肠杆菌细胞膜在缩合单宁的作用下增厚，扫描电子 显微镜观察发现当添加较高浓度缩合单宁时，大肠杆菌菌体表面被一层膜外物质包裹。大肠 杆菌细胞膜的通透性在200pg／ml缩合单宁添加量下显著降低。为进一步确定紫色达利菊所 含缩合单宁对反刍动物后肠消化及后肠大肠杆菌的影响，分别在2009和2010年进行放牧试 验，试验采用随机区组设计，处理为对照组(不含紫色达利菊以雀麦草为主的草地)，试验组 I(以紫色达利菊与雀麦草为主的草地)和试验组II(以紫色达利菊与针茅草和雀麦草混合 用于分析植物和粪 的草地)。于2009和2010年夏季和秋季在试验地采集植物样品和粪样， 样的化学成分及粪样中的大肠杆菌数量。缩合单宁含量在试验组I和Ⅱ显著高于对照组 显著低于对照组(Po．05)。秋季放牧中，对照组粪样pH、总氮、有机物消化率、氨态氮和 挥发性脂肪酸显著高于试验组I和II而乙酸／丙酸低于对照组(Po．05)。夏季放牧动物粪样各 指标差异不显著。因此，紫色达利菊所含缩合单宁可能通过改变大肠杆菌细胞膜或与细胞膜 相互作用来抑制大肠杆菌的生长，从而减少肉牛粪便中的大肠杆菌数量。 实验二、紫色达利菊及其与禾本科和豆科牧草混合氮代谢规律的研究。 为确定紫色达利菊中缩合单宁的分布和体外瘤胃降解率，分别在营养生长期和盛花期采 集整株植物，测定叶、茎和花所占的比例以及总酚，可提取单宁、蛋白结合单宁和纤维结合 单宁的含量。花中总缩合单宁的含量显著高于茎和叶的含量口O．05)。营养生长期叶中的总 酚和总缩合单宁都高于盛花期。紫色达利菊不同部位可提取单宁的量远高于蛋白结合单宁和 x 纤维结合单宁。盛花期整株植物缩合单宁含量高于营养生长期(P0．001)。体外试验采用2 2析因试验设计，将不同草地采集的两期植物放入三套DAISYII发酵器中，同时每个发酵器 中的两个发酵罐添加聚乙二醇(单宁活性抑制剂)，分别在0，1，2，4，8，12，24，48和72h取样。 营养生长期具有较高的真干物质和真氮消化率，同时干物质和氮素中潜在降解部分(6)均高 于盛花期。营养生长期干物质中快速降解部分(口)要高于盛花期口0．001)，而氮素中的快 速降解部分却低于盛花期(PO．01)。添加聚乙二醇后，营养生长期干物质的慢速降解部分速 率常数(C)增加(P0．01)但对盛花期无影响。添加聚乙二醇增加盛花期真氮素潜在降解部 分，对营养生长期无影响。两期紫色达利菊体外12h残留饲料615N的含量在添加聚乙二醇后 东北农业大学农学博士学位论文 显著增加(Po．01)。这表明紫色达利菊在营养生长期拥有较高的瘤胃消化率而在盛花期其 缩合单宁对氮素的消化率有一定影响，同时两期植物所含缩合单宁均在消化过程中对微生物 的附着有一定影响。但总的来看，高缩合单宁对紫色达利菊真干物质和真氮的消化率影响不 大。 为确认紫色达利菊与冷季禾本科植物混合对瘤胃发酵和菌体蛋白合成的影响。测定了紫 色达利菊与混合冷季植物样品(冷季植物以雀麦草为主)，并用缩合单宁含量在7，14，29和 42 DM的样品进行体外发酵试验。试验采用4×2析因试验设计，重复两次。61N硫酸 g／kg 氨用来测定菌体蛋白合成效率。添加聚乙