结核分支杆菌株水平鉴定技术及其研究进展.pdfVIP

生垡煎煎瘟堂韭查!哟!至12旦墨型鲞塑12塑些坐』堡P!d!!翼I．堕墅堕12Q业：№!：型：垒虫．12 1153 ·综述· 结核分支杆菌株水平鉴定技术及其研究进展 刘敬华万康林成诗明 足s2 月 结核分支杆菌菌株分型对结核病流行病学调查和监测、 杂交，而且具有分辨能力高、图谱相对稳定的特点。但是，分 传染源的发现、传播途径的阻断以及发病机制的研究都极为 离株染色体DNA经RFLP分析后，在琼脂糖凝胶上产生数 重要。结核分支杆菌的分型方法，主要分为非核酸法和核酸 百个条带难以区分，有的条带未显出或相互重叠，只有凝胶 法。非核酸分型方法即传统分型方法，多是在细菌表型特征 顶部的少数大片段能够进行比较，在实际工作中识别起柬非 的基础上认识细菌的，包括生化分型法、血清分型法和噬菌 常困难，几乎无法鉴别菌株类型。 体分型法。但由于结核分支杆菌分离株具有高度同源性，通 (2)DNA指纹图谱方法：DNA指纹图谱分型方法由 过常规的生化试验和血清学方法是无法鉴别的，所以，对于 Rn』P方法衍生而来，是将经过提纯的结核杆菌染色体DNA 结核分支杆菌，唯一可用的传统的菌株鉴定方法只有噬菌体 用限制性内切酶消化后，在琼脂糖凝胶中电泳分离，再将限 分型法。随着分子生物学理论和技术的飞速发展，】980年蹦 制性片段转移到尼龙膜或纤维素膜上，与带标记的已知 后，逐步建立了一些根据核酸序列进行菌株鉴定的高度特异 DNA探针杂交，然后检测与探针同源的限制性片段的数目 的基因分型方法，即核酸法。主要包括：限制性片段长度多 和大小的变化，以区别菌株。每个菌株所呈现的特征性带型 态性(RFLP)、DNA指纹图谱分析、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、即指纹图谱型。在这种分型方法巾所选择的用于菌株分型 聚合酶链反应(P[、R)酶切分型、随机扩增多态性(RAPD)的遗传标志必须具有菌株内稳定性和菌种内多拌性的特点， I】NA、DNA序列分析以及基因芯片技术等等。随着上述方目前结核分支杆菌DNA指纹图谱分析方法普遍采用插入序 法的应用，使结核分支杆菌的菌株分型进入了一个全新的领 列或其他重复序列作为分型的标志，包括：Is6110、Isl08l、短 域，也进而使结核病流行病学的研究取得了很大的进展，现 将对上述各分型方法综述如下。 ①Is6110 I)№指纹图谱的标准方法：IS6110含有 一、传统分型方法——噬菌体分型法 1355 bp的反向末端重复序列，属于插入序 bp的核苷酸和28 噬茵体具有高度的宿主特异性和一定的宿主范围，不同 列IS3家族的一个成员。它只存在于结核杆菌复合群中，而 型另怕々结核杆菌对不同噬菌体的敏感性不同，以此为依据将 且在结核分支杆菌不同亲本的菌株中Is61lO的拷贝数和染 结核杆菌的不同型别区分开来。这种方法已用于结核病爆 色俸位置是高度变异的，在菌株传播期间并能保持稳定，特 发性流行的调查等方面，较好地了解了结核病的传播…。但 别适于结核分支杆菌株水平的鉴定口“。Embd眦等”1在 是，在实际分离过程中，大多数分离株只能分离出几个主要 1993年推荐了标准的结核分支杆菌RFLP分析方法，这种方 的类型，很难反映菌株的遗传学关系，特异性也不够理想。 法已在国际上得到广泛的认同与应用，使全球范围内结核分 此外，噬菌体分型法对技术要求高，操作复杂，准确性要受培 支杆菌株水平鉴定的比较成为可能。IS6110指纹图谱的标 养条件的限制，国际上只有几个实验室能大规模地进行这种 准方法在结核杆菌的分型方面得到了广泛的应用，具有很强 分析，这使得对结核病爆发和在较大范围进行特异菌株的追 的鉴别菌株的能力。但是这种