硝酸盐还原试验快速检测分离株和痰标本结核分枝杆菌的耐药性.pdfVIP

· · 692 主堡煎堡堑堂盘查；!!!笙!旦箜!!鲞箜!塑 ·实验研究· 汉坦病毒N蛋白的重组表达及其用于IgM 直接捕捉ELISA的建立和应用 朱函坪 姚苹苹 徐芳 翁景清 谢荣辉 陆群英 朱智勇 严杰 【摘要】 目的 克隆并表达汉坦病毒(HV)zlo株(HV—zlo)N蛋白(NP)编码基因，建立基于辣 者血清并评价其检测效果。方法 PcR扩增Hv—zlo株NP编码基因，基因工程方法构建NP编码基 因原核表达系统pET28a—z10N～E．∞ziBL21DE3。sDSPAGE了解rNP表达情况，离子交换法和Ni— NTA亲和层析法提纯rNP。westernblot检测rNP的特异性免疫反应性。建立HRP标记rNP—I叠M 直接捕捉ELISA检测HFRs患者血清样品，并与常规HV—IgM问接捕捉ELISA进行比较。结果 pET28a—zloN—E．“澎BL21DE3高效表达rNP。提纯rNPs胍PAGE显示单一蛋白条带，HV—IgG能 血清样品A。，。值分布及对多份不同稀释度血清检测的A。，。均值变化均相似。结论 成功构建了 HV—zlO株NP编码基因高效原核表达系统。所建立的rNP-IgM直接捕捉ELISA可作为HFRs简 便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法。 【关键词】汉坦病毒；N蛋白；重组表达；IgM捕捉EI。ISA ontherecombinant HantaanVjrus Nand lheestablishmentand of Study expressi伽0f prOtein application direct ELISAZHU rNP—IgM capture Ha”一∥”g”，YAOPi”g_pi竹g，XU Fa，zg，WENG^砣g—qi”g，X雎? J缸． Ro玎乎^甜i，LUQ“咒一∥ng，ZHL，Z矗i一弘理g，YAN‘D眵加rfmP雄￡o，M耐ic血ZM缸rD6io￡q射盘咒d 心r口5加Z 0_删，CDzzt驴盯M以捌”e，劢巧施ng【胁iw勿，f缸ng如o“310058，China o“￡^or：y4^f (为r，‘舀pD挖di咒g JiP，Email：medbp@zju．edu．cn 【Abstract】 Toclonethe hantav扫usstrain objective geneencodingnucieocapsidpmtein(NP)of constructits aswellaStoestablisha direct Z10(HV—Z10)，to pmkaryoticexpressionsystem rNP—IgM ELISAon order capture basedHRP—labeledrecombinantNP(rNP)，intodetectserumsampleSofpatients fmm feverwithrenal toevaluatetheeffectsofdetection． sufferinghemorrhagic syndrome(HFRS)and MethodsGene NPofstrainHV—ZlOwas PCRandthenits encoding amplifiedby prokaryoticexpression co如BL21DE3w