实验显微镜的使用细菌的简单染色要点.pptVIP

瞳 距 调 节 屈光度调节：可以适应双眼视力有差异的观察者。 * 微生物学实验 生命科学学院 实验一 显 微 镜 的 使 用 细菌的简单染色 (3学时) 实验内容涉及教材：实验2、7、12等。 一 目的要求 1 复习普通光学显微镜的结构、功能和操作技术；学习油镜的工作原理和使用方法； 2 掌握细菌的制片和简单染色技术，观察球菌和杆菌等在光学显微镜下的基本形态特征； 3 建立“无菌概念”，体会无菌操作的重要性。 二 实验器材 1 菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 2 溶液和试剂 香柏油、二甲苯、吕氏碱性美兰染液、水等。 3 仪器和其它用品 普通光学显微镜、载玻片、酒精灯、火柴、擦镜纸、接种环、废液缸、滤纸、纱布等。 三 基本原理 ㈠ 普通光学显微镜 微生物个体微小，必须借助显微镜才能观察到，显微镜是微生物学者不可缺少的基本工具。 普通光学显微镜利用目镜、物镜两组透镜系统来放大成像，常称为复式显微镜，由机械装置和光学系统两大部分组成。 1 机械装置 镜座和镜臂：镜座支持整个显微镜，镜臂支持镜筒部分。 镜筒：上接目镜，下接转换器，分为单筒和双筒两种。 转换器：是一个金属圆盘，上面装有3-4个物镜，可以使物镜通过镜筒和目镜组成一个放大系统。 载物台：放置镜检标本，中间有通光孔。载物台上装有标本夹和标本推进器，在推动器上具有刻度，能够确定标本位置，便于找到观察视野。 调焦装置： 调节物镜与标本间距离的结构。 粗动螺旋 微动螺旋 2 光学系统 物镜：安装在转换器上，将物体第一次放大，决定显微镜的成像质量和分辨能力。 目镜：安装在镜筒上端，由两块透镜组成，将物镜成的像再次放大，但是不增加分辨力，目镜放大倍数过大，反而影响观察效果。 聚光器：由聚光镜和虹彩光圈组成，调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，使适当强度的光线照射到标本上。 光源：安装在镜座内，通过开关控制。 滤光片：可见光由不同波长的光线组成，使用滤光片可以得到所需的一种波长的光线，提高分辨率、增加反差。 一台显微镜由机械装置和光学系统组成，其中物镜是显微镜最重要的部件。 物镜通常有三种，低倍镜、高倍镜、油镜。低倍镜的放大倍数一般为4-10×、高倍镜的放大倍数一般为40-45×、油镜为95-100×，是放大倍数最大的物镜。 ㈡ 油镜的工作原理 1 提高分辨率 0.5 l 最小可分辨距离= ———— n sin q 分辨率是决定显微镜观察效果的重要指标， 显微镜分辨率越高，能达到的最小可分辨距离越小。 λ为所用光源波长；n=载玻片与物镜间介质的折射率。 镜口角是光线投射到物镜上的最大角度，q为物镜镜口角半数，取决于物镜的直径和工作距离。 n：玻片与物镜间介质的折射率。 显微镜数值孔径(numerical aperture, NA)：指镜口角一半的正弦与载玻片物镜间介质折射率的乘积，是决定物镜性能的最重要指标。 空气 (n=1.0)、水 (n=1.33)、香柏油 (n=1.52)，介质折射率提高 数值孔径值提高 分辨率提高。 0.5 l 最小可分辨距离= ———— n sin q 光线在穿过折射率不同的介质时发生折射。 2 提高照明度 空气(n=1.00) 玻璃(n=1.52) 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 对于油镜：工作介质是香柏油。 空气 (n=1.00) 玻璃 (n=1.52) 香柏油(n=1.52) 对于低倍镜和高倍镜：介质是空气 ㈢ 细菌的简单染色 细菌个体微小，无色透明，不经过染色，常常不容易观察。经过