4种禽病毒抗体可视化蛋白芯片的制备及应用.pdfVIP

中国农业科学 2009, 42(4):1413-1420 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.035 4种禽病毒抗体可视化蛋白芯片的制备及应用 1 1 1 1, 2 1, 2 1 1 1 1 石 霖 ，王秀荣 ，杨忠苹 ，陶启蒙 ，蔡冬冬 ，武嘉男 ，王馥梅 ，田国彬 ，陈化兰 1 （中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物国家重点开放实验室，哈尔滨 150001 ； 2 东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030 ） 摘要：【目的】研制可同时鉴别检测 AI、ND、IB、IBD 等 4 种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。【方法】用 超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了 4 种病毒蛋白抗原，调整到合适浓度后点于醛基修饰的片基上，制备蛋 白芯片；分别用 4 种禽病阳性血清杂交，再与金标二抗杂交，银染显色后读取结果，建立 4 种禽病的可视化蛋白 芯片工作平台；进一步对此芯片的特异性以及灰度值与抗体浓度的相关性进行了研究；最后对18个现地血清样品 进行了初步应用检测。【结果】结果显示经过条件优化后，芯片检测探针可特异性的相应的抗体进行杂交，呈现 较强的杂交信号，且无交叉杂交。信号灰度值在抗体浓度为50～300 μg·ml-1 范围内成线性关系。用芯片和其它传 统抗体检测方法同时检测18 份现地样品，结果发现可视化蛋白芯片具有很好的特异性，并且灵敏性明显高于传统 检测手段。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别4种禽病抗体，是一种有效的抗体检测新方法。 关键词：可视化；蛋白芯片；禽病；鉴别 Production and Preliminary Application of a Visual Protein Chip to Differentiate Antibodies of Four Poultry Diseases 1 1 1 1, 2 1, 2 1 SHI Lin , WANG Xiu-rong , YANG Zhong-ping , TAO Qi-meng , CAI Dong-dong , WU Jia-nan , 1 1 1 WANG Fu-mei , TIAN Guo-bin , CHEN Hua-lan 1 ( Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Animal Influenza Laboratory of Ministry of Agriculture/National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin 150001 ; 2College of Veterinary Medicine, Northeast Agriculture University, Harbin 150030)