TRV介导的大豆基因瞬时沉默体系的建立.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(12):2479-2486 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.12.021 TRV介导的大豆基因瞬时沉默体系的建立 刘晓彬，刘 娜，李福宽，吴立柱，张 洁，王冬梅 （河北农业大学生命科学学院，河北保定 071001 ） 摘要：【目的】病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing，VIGS）技术已在植物基因功能研究 领域得到广泛应用。建立以TRV为载体介导的大豆基因瞬时沉默体系，为将烟草脆裂病毒（ Tobacco rattle virus， TRV）介导的基因沉默技术在大豆与大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus，SMV）互作体系中对大豆基因功能进 行研究提供基础。【方法】从大豆品种冀豆 7 号（J7）叶片中特异性扩增八氢番茄红素脱氢酶基因（ GmPDS ）的部 分片段，并将该基因片段插入质粒pTRV ﹕RNA2中；向J7 的第一位真叶注射携带有TRV或TRV ﹕ GmPDS 的农杆菌， 注射后对上部未接种病毒的叶片进行表型观察，并通过半定量RT-PCR检测 GmPDS 的表达量。为探讨接种TRV是否 影响大豆对 SMV 的抗性表现，在大豆第一片真叶上预接种 TRV 病毒后 10 d，再分别接种 SMV 株系 N3 和 SC-8，以 单独接种N3或 SC-8作为对照。待接种SMV后第5天观察未接种的上位叶表型并检测SMV的外壳蛋白基因 CP。【结 果】大豆叶片注射携带有TRV ﹕ GmPDS 的农杆菌后25 d，上部未接种病毒的叶片出现了白化现象，通过半定量RT-PCR 分析，发生白化的植株中 GmPDS 的表达量明显降低。在此基础上，向大豆叶片预注射携带有 TRV 的农杆菌后再接 种 SMV，SMV 株系 N3 和 SC-8 与 J7 分别组成不亲和与亲和组合。 发现 J7 第一片真叶上预接种 TRV 后再接种 SMV 株系N3，与单独接种N3对上位叶的影响在表型上表现一致，对未接种的上位叶片进行病毒外壳蛋白基因 CP 检测， 发现 J7 单独接种 N3 以及预接种 TRV 后再接种 N3 的上位叶片上均未能检测到 CP 表达。而 J7 单独接种 SMV 株系 SC-8，以及预接种 TRV 后再接种 SC-8 均在上位叶上能够检测到 CP。说明在 J7 上预接种 TRV 不影响 J7 对 SMV 的 抗性。在感病品种南农1138-2上也获得了相似结果。【结论】建立了以TRV为载体介导的大豆基因瞬时沉默体系， 并证明在大豆上先接种TRV 不改变大豆对SMV的抗性表现。 关键词：病毒诱导的基因沉默；大豆；烟草脆裂病毒；大豆花叶病毒；大豆八氢番茄红素脱氢酶基因 Establishment of TRV-mediated Transient Gene-Silencing System in Soybean LIU Xiao-bin, LIU Na, LI Fu-kuan, WU Li-zhu, ZHANG Jie, WANG Dong-mei (College of Life Sciences, Agricultural University of Hebe