飞蝗羧酸酯酶基因LmCesF1的时空表达及与杀虫剂耐受性的关系.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(8): 1522-1530 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.08.008 飞蝗羧酸酯酶基因LmCesF1 的时空表达 及与杀虫剂耐受性的关系 张建琴，葛娉婷，李大琪，王 燕，张建珍，马恩波 （山西大学应用生物学研究所，太原 030006 ） 摘要：【目的】通过研究飞蝗（Locusta migratoria ）羧酸酯酶基因LmCesF1 的杀虫剂解毒功能，为害虫防 治提供新的候选基因。【方法】从飞蝗转录组数据库搜索获得羧酸酯酶基因LmCesF1 的cDNA 序列，采用ExPASy 在 线软件推测LmCesF1 的氨基酸序列，并预测该酶的分子量（MM ）和等电点（pI ）；在NCBI 保守域（CDD ）数据库 中预测该酶的催化三联体和底物结合位点；采用SignalP4.0 在线软件预测该酶的信号肽序列；NetNGlyc 在线软 件预测该酶的N 糖基化位点。将LmCesF1 与其他昆虫物种羧酸酯酶进行NJ 聚类分析；以飞蝗各龄期（卵期、5 个 若虫期和成虫期）整虫cDNA 和5 龄若虫不同组织部位cDNA 为模板，运用reverse transcription quantitative PCR (RT-qPCR) 研究LmCesF1 的时空表达特性；采用RT-qPCR 方法检测RNA 干扰效率；LmCesF1 基因沉默后24 h 分 别进行4 种农药的生物学测定试验，每头若虫点滴3 μL 的杀虫剂溶液（每个农药的剂量均为LD ，即240 ng 马拉硫 30 磷、15 ng 毒死蜱、51 ng 西维因和0.6 ng 溴氰菊酯），点滴农药24 h 后统计飞蝗的死亡率，进而分析该基因与 农药解毒的关系。【结果】LmCesF1 全长cDNA 序列为 3 121 bp，该基因开放阅读框（ORF ）为2 490 bp，编码830 个氨基酸，氨基酸序列N 端存在信号肽序列，催化三联体为G-P-N，聚类分析表明该基因属于羧酸酯酶的F 簇（属 于非鳞翅目昆虫保幼激素酯酶）。LmCesF1 在飞蝗卵期及若虫低龄期表达较低，在4 龄若虫表达上调达到峰值，且 一直持续到成虫第5 天。5 龄若虫不同组织部位表达结果显示，LmCesF1 在前肠、后肠和脂肪体表达量最高，在胃 盲囊和中肠的表达量最低。RNA 干扰沉默效率检测结果显示，与对照组相比（注射等量的dsGFP ），LmCesF1 在12 h 和24 h 的沉默效率显著，mRNA 表达量分别下降为22.6%和30%。RNA 干扰结合农药生物学测定结果表明，在沉默 LmCesF1 后，与对照组比较（注射等量的 dsGFP ），西维因处理组飞蝗死亡率提高了 32.9%，马拉硫磷、毒死蜱和 溴氰菊酯处理组飞蝗的死亡率均没有显著性差异，推测LmCesF1 可能参与西维因的解毒，而与其他3 种农药的解 毒没有相关性。【结论】从飞蝗中获得1 条保幼激素酯酶（JHE ）相似基因LmCesF1，该基因属于羧酸酯酶的F 簇， 推测的氨基酸序列催化三联体发生了改变；该基因在不同组织部位中均有表达，并可能参与西维因在飞蝗体内的 解毒。 关键词：飞蝗；羧酸酯酶；reverse transcription quantitative PCR；RNA 干扰 Spatio-Temporal Expression and Insecticide Tolerance Analysis of Carboxylesterase Gene LmCesF1 from Locusta migratoria ZHANG Jian-qin, GE Ping-ting, LI Da-qi, WANG Yan, ZHANG Jian-zhen, MA En-bo (Research Instit