花生2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶基因VTE3的克隆及多态性分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(9): 1685-1695 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.09.003 花生2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶基因 VTE3 的克隆及多态性分析 郭安强，万勇善，刘风珍 （山东农业大学农学院/作物生物学国家重点实验室/ 山东省作物生物学重点实验室，山东泰安 271018 ） 摘要：【目的】分离花生2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶（MPBQ MT）基因 VTE3，揭示其分子生物学特 征及遗传多态性。【方法】利用EST 拼接、RT-PCR 以及以DNA 为模板的PCR 扩增技术，从花生属栽培种中分离VTE3 全长cDNA；从不同类型栽培品种和花生属花生区组二倍体野生种（Arachis duranensis 和A. ipaensis ）中分 离VTE3 全长DNA，进行VTE3 序列多态性分析，并构建VTE3 的进化树。【结果】从3 个栽培品种中分别克隆得到2 条VTE3 cDNA 序列（命名为rVTE3-1 和rVTE3-2），rVTE3-1 和rVTE3-2 的编码区长均为1 059 bp，二者同源性97.8%， 存在10 个变异位点，其中8 个为SNP 变异；二者均编码351 个氨基酸，氨基酸序列同源性98.6%，存在5 个氨基 酸差异。从13 个栽培品种分别克隆得到2 条VTE3 DNA 序列（命名为gVTE3-1 和gVTE3-2），13 个品种间gVTE3-1 的同源性为99.9%，gVTE3-2 的同源性为100%。其中丰花2 号gVTE3-1 序列长2 710 bp，存在3 个内含子，分别 位于44—163、772—1 295 和1 603—2 437 bp 处；gVTE3-2 序列长2 706 bp，也存在3 个内含子，分别位于44 —169、778—1 291 和1 599—2 433 bp 处。丰花2 号gVTE3-1 和gVTE3-2 同源性96.6%，内含子区域存在36 个 SNP 位点和3 个限制性内切酶识别的多态性位点。从A. duranensis 分离的VTE3 DNA 序列命名为gVTE3-A，从A. ipaensis 分离的VTE3 DNA 序列命名为gVTE3-B。利用栽培种丰花2 号gVTE3-1 和gVTE3-2 以及野生种gVTE3-A 和 gVTE3-B 4 条DNA 序列进行进化分析，推测序列gVTE3-1 和gVTE3-2 分别来自丰花2 号的A、B 染色体组。花生MPBQ MT 氨基酸序列与其它物种的同源性较高，具有很强的保守性。【结论】本研究克隆了花生VTE3 的全长cDNA 和DNA； 推断栽培品种的gVTE3-1 和gVTE3-2 分别来自A、B 染色体组，不同染色体组的VTE3 多态性位点丰富；不同栽培 品种间等位基因核苷酸序列差异很小，所检测13 个栽培品种的gVTE3-1 以及野生种的gVTE3-A 间存在等位变异， 13 个栽培品种的gVTE3-2 以及野生种gVTE3-B 间未发现等位变异。 关键词：花生；维生素E；2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶；基因克隆 Cloning and Polymorphism of 2-Methyl-6-Phytyl-1, 4-Benzoquinol Methyltransferase Gene (VTE3) in Arachis GUO An-qiang, WAN Yong-shan, LIU Feng-zhen (College of Agronomy, Shandong Agricultural University/State Key Laboratory of Crop Biology/Shandong Key Laboratory of Crop Biology, Taian 271018, Shandong)