黑麦染色体组中一个新重复序列的发现、定位与应用.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(8):1587-1593 Scientia Agricultura Sinica 黑麦染色体组中一个新重复序列的发现、定位与应用 刘 成，杨足君，冯 娟，迟世华，周建平，任正隆 （电子科技大学生命科学与技术学院，成都 610054 ） 摘要：【目的】寻找黑麦基因组中新的重复序列作为特异PCR标记。【方法】以普通小麦中国春、川农18、育 成品系R111、绵阳11为对照，以荆州黑麦、秦岭黑麦、非洲黑麦、森林黑麦为材料，用RAPD法筛选到黑麦基因 组中的一个高拷贝 DNA 片段 OPD15 ，将 OPD15 输入到 NCBI 的 BLAST 框中进行比对。根据 OPD15 设计特异 PCR 940 940 940 引物 D15F 和 D15R，利用这对引物对小麦族物种进行扩增，验证 OPD15940 的特异性。进而利用原位杂交技术定位 pScD15 在染色体上的位置。【结果】序列比对后发现 OPD15 与重复序列 Sukkula 中近 60 个 53bp 的小片段有较 940 940 高的同源性，但又不同于 Sukkula，是一类新的重复序列。通过特异 PCR 确定仅含黑麦染色质的物种能扩增出 OPD15 ，因而 OPD15 为黑麦所特有。原位杂交结果显示除端部区域外，pScD15 弥散状分布在黑麦整套染色体 940 940 940 上。【结论】OPD15 可以作为分子标记检测导入到小麦背景中的黑麦染色体。 940 关键词：黑麦；重复序列；原位杂交；特异PCR Detection, Mapping and Application of a New Repetitive DNA Sequence in Rye (Secale cereale L.) Genome LIU Cheng, YANG Zu-jun, FENG Juan, CHI Shi-hua, ZHOU Jian-ping, REN Zheng-long (School of Life Sciences and Technology, University of Electronic Science and Technology, Chengdu 610054) Abstract: 【Objective 】 New repetitive sequence as specific molecular marker for rye genome was developed. 【Method 】Using common wheat Chinese Spring, R25, R111 and MY11 as control, we screened genome-specific repetitive DNA sequence from Secale cereale cv. Jingzhou rye, S. cereale. L. Qingling rye, S. africanum and S. silvestre. A high copy specific DNA segment OPD15940 of rye genome was obtained by using random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. Based on the sequ