牛Sry启动子调控序列的鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(14):2996-3004 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.14.019 牛 Sry 启动子调控序列的鉴定 2 1 3 1 1 韩凤桐 ，林秀坤 ，刘 娣 ，吴 宁 ，廖 冰 1 2 （中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193 ； 哈尔滨工业大学 基础与交叉科学研究院生命医学工程研究中心，哈尔滨 150080 ； 3 黑龙江省农业科学院，哈尔滨 150086 ） 摘要： 【目的】 Sry 是大多数哺乳动物雄性性别发育的决定基因，但人们仍未找到其表达的调控规律，本试 验对牛 Sry5′端调控序列作了初步的研究，为深入研究牛 Sry 的表达调控奠定了基础。【方法】克隆牛Sry 5′端侧 翼 1 056 bp 长的 DNA 序列，利用生物信息学方法对这一区域内潜在的转录起始位点进行了预测，并构建了 10 个 不同长度的缺失牛 Sry 5′部分侧翼序列的报告基因载体；进一步分离了胎牛生殖嵴，进行生殖嵴细胞的原代培养， 并对胎牛生殖嵴细胞进行了性别和特征鉴定；最后利用荧光素酶双报告基因分析系统，在生殖嵴细胞内检测了牛 Sry 核心启动子区域的位置。【结果】体外培养的生殖嵴细胞可以表达雄性生殖嵴细胞的特征基因 Sry、Sox9、Sf-1 和 Dax1，牛Sry5′端-93、-419和-722处存在3个潜在的转录起始位点（TSS），-599—-565区域35bp内存在控制 Sry 基础转录活性的顺式调控元件，其中存在多个潜在的转录因子结合位点。【结论】牛Sry 5′端 UTR 区-599— -565 bp区域35 bp存在部分调控序列。 关键词：牛；Sry；核心启动子；双荧光素酶报告基因分析系统 Identification of the Regulation Sequences of Bovine Sry Promoter 2 1 3 1 1 HAN Feng-tong , LIN Xiu-kun , LIU Di , WU Ning , LIAO Bing 1 2 ( Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193; Bio-x Center, Academy of Fundamental and Interdisciplinary Sciences, Harbin Institute of Technology, Harbin 150080; 3Agricultural Academy of Heilongjiang Province, Harbin 150086) Abstract: 【Objective 】 Sry is the pivotal gene initiating male sex determination in most mammals, but