基于cDNA-AFLP发掘茶树被茶尺蠖取食诱导的相关差异基因及其表达特征.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(19):4119-4130 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.19.018 基于cDNA-AFLP 发掘茶树被茶尺蠖取食诱导的 相关差异基因及其表达特征 曹士先，程 曦，蒋正中，盛 亮，上官明珠，邓威威，韦朝领 （安徽农业大学茶与食品科技学院/茶叶生物化学与生物技术省部共建国家重点实验室培育基地/农业部茶树生物学与茶叶加工重点实验室， 合肥230036 ） 摘要：【目的】发掘茶树被茶尺蠖取食诱导的相关防御基因及其分子防御机制。【方法】利用cDNA-AFLP 筛选 茶树叶片被其主要害虫茶尺蠖取食后差异表达片段（transcript-derived fragment，TDF），并对其进行生物信息 学分析和相关验证；运用qRT-PCR （quantitative real-time PCR）研究部分差异基因的表达规律。【结果】茶树 被茶尺蠖取食后，共发现231 条TDF，经PCR 验证和测序后，成功获得134 条EST （expressed sequence tags） 序列，其中上调与下调表达的TDF 数量分别为81 和53 条，各占测序获得序列的60.4%与39.6%；利用BLASTx 在 GenBank 进行比对与功能分析可知，其中的23.1%与代谢相关，9.0%跟光合作用与能量相关，跟蛋白质合成与贮藏 相关的序列各占 8.2%，与信号转导相关的占6.0%，跟抗病与防御相关的占5.2%，但与细胞生长及细胞结构、转 录因子和运输相关的数量很少，分别为1.5%、2.2%和3.0%；此外，还有6.7%的TDF 功能不明确，有20.1%的无同 源性序列；利用qRT-PCR （quantitative real-time PCR）对TDF 21F1、22D、27L3 和28F 分别进行了表达特征 分析，结果表明这4 个TDF 代表的基因在茶树被茶尺蠖取食后均有不同程度诱导。【结论】通过cDNA-AFLP 技术发 掘了多个茶树被茶尺蠖取食诱导的差异表达基因片段，初步揭示了茶树被害虫取食而诱导的分子防御机制。 关键词：茶树；茶尺蠖；取食诱导；cDNA-AFLP；防御机制 Differential Genes Expression in Tea Plant (Cameilla sinensis L.) Induced by Ectropis oblique Feeding Based on cDNA-AFLP CAO Shi-xian, CHENG Xi, JIANG Zheng-zhong, SHENG Liang, SHANGGUAN Ming-zhu, DENG Wei-wei, WEI Chao-ling (College of Tea Food Science and Technology, Anhui Agricultural University/Ministry-State Key Laboratory Breeding Base of Tea Biochemistry Biotechnology/Key Laboratory of Tea Plant Biology Tea Processing, Ministry of Agriculture, Hefei 230036) Abstract : 【Objective 】The objective of this study is to screen the defense genes in tea plant (Camellia sinensis L.) induced by tea looper (Ectropis oblique). 【Method 】Tea leaves fed by the looper were analyzed by cDNA-AFLP(cDNA-amplified