家蚕脑核蛋白抽提及其与PTTH基因启动子的凝胶阻滞分析.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(1):265-271 Scientia Agricultura Sinica 家蚕脑核蛋白抽提及其与PTTH基因启动子的凝胶阻滞分析 1，2 1 1 2 魏兆军 ，洪桂云 ，姜绍通 ，鲁 成 1 2 （合肥工业大学生物与食品工程学院生物工程系，合肥 230009 ； 西南大学农业部蚕桑学重点实验室，重庆 400716 ） 摘要：【目的】转录调控对于明确昆虫许多生理过程如抗药性、抗病性、行为、进化及发育等方面的机理具 有重要意义。家蚕PTTH是调控生长发育的重要神经肽，明确其转录调控机理对阐明其表达的发育和组织特异性具 有重要价值。【方法】本文克隆并测定了家蚕PTTH启动子序列，利用Matinspector分析软件预测该片段可能包含 的顺式作用元件，采用高糖抽提缓冲液抽提家蚕脑核蛋白；标记 PTTH 启动子片段进行凝胶阻滞分析。【结果】家 蚕 PTTH 启动子分析含有 MEF2、TATA box、pbx-1 等元件；抽提获得理想的脑核蛋白，脑核蛋白可以与 PTTH 转录 起始位点附件 119bp 的序列特异地结合，把 TATA Box 的 TATATAA 突变后，脑核蛋白与突变后的探针 MBS2 不能结 合。【结论】表明本研究中抽提的脑核蛋白是有效的，首次检测家蚕 PTTH 启动子可以与转录因子特异结合，初步 鉴定了TATA Box。 关键词：核蛋白；凝胶阻抑分析；PTTH基因；家蚕 Extraction of Nuclear Proteins from the Brains of Bombyx mori and Electrophoretic Mobility Shift Assay with Promoter of PTTH Gene 1,2 1 1 2 WEI Zhao-jun , HONG Gui-yun , JIANG Shao-tong , LU Cheng 1 ( Department of Biotechnology, School of Biotechnology and Food Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009; 2Key Sericultural Laboratory of Agriculture Ministry, Southwest University, Chongqing 400716) Abstract: 【Objective 】 Knowledge of gene transcriptional regulation is a critical component of understanding many issues relevant to entomology, including pesticide and disease resistance, behavior, evolution, and development. Prothoracicotropic hormone (PTTH) is one of the key player in regulation of insect development and growth. Properties of transcription regulation of PTTH are assumed to be an increasingly important role in elucidating the molecular