家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白.pdfVIP

家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白.pdf

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中国农业科学 2013,46(18):3922-3929 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.18.023 家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白 1 1,3 2 1 1 2 1 尤征英 ,危 浩 ,阮系真 ,叶露鹏 ,王少华 ,周继勇 ,钟伯雄 1 2 3 (浙江大学动物科学学院特种经济动物科学系,杭州 310029; 浙江大学农业部动物病毒学重点实验室,杭州310029; 湖北省畜禽育种中心, 武汉430070 ) 摘要: 【目的】采用家蚕丝腺生物反应器这一蛋白高效表达系统,尝试建立一种高效、低廉、稳定生产狂犬 病病毒核蛋白(RVNP)的技术体系,为生产基因工程疫苗奠定基础。【方法】通过RT-PCR 方法克隆获得RVNP 序列, 采用家蚕丝胶蛋白基因(Ser1)启动子为特异性启动子,将RVNP 构建到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标 记基因的piggyBac 转座子表达载体(pBA3EGFP)中,并采用显微注射转基因家蚕技术构建家蚕丝腺生物反应器。 【结果】G1 代通过EGFP 标记的筛选获得转基因家蚕阳性蛾区26 个,蛾圈阳性率为59.09%。PCR 实验证实RVNP 已经整合到家蚕基因组中,Western blot 分析表明 RVNP 蛋白可能附着于丝胶蛋白并随家蚕吐丝行为分泌到蚕茧 中。【结论】获得了能够表达外源的RVNP 蛋白的转基因家蚕品系,该系统有望成为高效、低廉、稳定地生产狂犬 病基因工程疫苗的技术体系之一。 关键词:狂犬病;丝腺生物反应器;piggyBac;家蚕 Expression of RVNP in the Silk Gland of Transgenic Silkworm (Bombyx mori) 1 1,3 2 1 1 YOU Zheng-ying , WEI Hao , RUAN Xi-zhen , YE Lu-peng ,WANG Shao-hua , 2 1 ZHOU Ji-yong , ZHONG Bo-xiong 1 2 ( Department of Special Economic Animal Science of College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou 310029 ; Key 3 Labor

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