家蚕整合素基因Bmintegrin alpha;PS3的鉴定及亚细胞定位.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(22):4808-4815 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.22.019 家蚕整合素基因Bmintegrin αPS3 的鉴定及亚细胞定位 谈 娟，张 奎，徐 曼，陈思源，崔红娟 （西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400716 ） 摘要：【目的】克隆家蚕整合素基因Bmintegrin αPS3，分析其mRNA 表达及亚细胞定位特征，并进行原核表 达及蛋白纯化，为进一步探究 Bmintegrin αPS3 在家蚕中的功能奠定基础。【方法】利用 RACE 方法克隆获得 Bmintegrin αPS3 的cDNA 全长序列；采用RT-PCR 方法检测Bmintegrin αPS3 的时空表达；在原核表达系统中 表达获得Bmintegrin αPS3 重组蛋白；并构建Bmintegrin αPS3 真核表达载体，转染家蚕胚胎细胞系分析其蛋 白亚细胞定位。【结果】家蚕整合素基因Bmintegrin αPS3 编码框全长为2 895 bp，编码965 个氨基酸，含有整 合素家族蛋白典型的integrin alpha 结构域，预测其为跨膜蛋白。构建了Bmintegrin αPS3 的原核表达系统， 并利用亲和层析纯化获得高纯度的Bmintegrin αPS3 原核表达蛋白，为进一步制备抗体获得足够的抗原。在家蚕 细胞系中外源表达 Bmintegrin αPS3 蛋白，显示其主要定位于细胞质和细胞膜中。另外，RT-PCR 结果显示 Bmintegrin αPS3 mRNA 在血细胞中为特异持续表达。【结论】获得了Bmintegrin αPS3 的完整cDNA 序列及表达 特征，经原核表达、纯化获得其融合蛋白，在细胞水平上初步分析了其亚细胞定位情况。 关键词：家蚕整合素基因；克隆；时空表达；原核表达；亚细胞定位 Identification and Subcelluar Localization of Bmintegrin αPS3from Silkworm (Bombyx mori) TAN Juan, ZHANG Kui, XU Man, CHEN Si-yuan, CUI Hong-juan (State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Southwest University, Chongqing 400716) Abstract : 【Objective 】Bmintegrin αPS3 was cloned, analyzed, and overexpressed either in Escherichia coli or silkworm cell line to provide a theoretical basis for further studying the function of Bmintegrin αPS3 in silkworm. 【Method 】The Bmintegrin αPS3 cDNA including the complete ORF sequence was cloned by RACE method. The spatial-temporal expression profile of Bmintegrin αPS3 was investigated by RT-PCR. Bmintegrin αPS3 protein was overexpressed using prokaryotic expression. In addition, Bmintegrin αPS3 was constructed into a transit expression vector, and transfect