昆虫抗真菌肽基因的分泌型表达及活性鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(4):842-849 Scientia Agricultura Sinica 昆虫抗真菌肽基因的分泌型表达及活性鉴定 1,2 1 1 1 3 4 1,2 桑延霞 ，邓小娟 ，杨婉莹 ，刘文权 ，王文献 ，黄亚东 ，曹 阳 1 2 3 （华南农业大学动物科学学院蚕丝科学系，广州 510642 ； 西南大学农业部蚕桑学重点实验室，重庆 400716 ； 华南农业大学资源环境学院 4 昆虫学系，广州 510642 ； 曁南大学医药生物技术研究开发中心，广州 510632 ） 摘要：【目的】黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)抗真菌肽Drosomycin (Drs)及其同系物Drosomycin-like C (Drs-lC)和斑腹刺螠蝽(Podisus maculiverntris)抗真菌肽Thanatin对丝状真菌具有广谱高效的抑杀作用。实 现抗真菌肽基因在酵母中的高效分泌型表达，对探讨利用转基因酵母的发酵液直接进行果蔬、食品和农产品防腐 保鲜的生物技术研发有重要意义。【方法】将Drosomycin 基因（ Drs ）及其同系物基因Drs-lC 和 Thanatin 基因分 别与酵母分泌型表达载体 pPICZαA 重组，构建成重组表达质粒 pPICZαA-Drs、pPICZαA-Drs-lC 和 pPICZαA　 Thanatin。利用电转化将重组质粒转化毕赤酵母 GS115，经表型筛选和 PCR 鉴定获得的重组毕赤酵母转化子，在 甲醇诱导下进行抗真菌肽的分泌表达。【结果】3种抗真菌肽基因的酵母表达产物对6 个供试真菌中的5个有明显 的抑制作用，Thanatin 同时对供试细菌有抗菌活性。【结论】 Drs、Drs-lC 和 Thanatin 抗真菌肽基因成功地转化 毕赤酵母，并实现其分泌型表达。 关键词：昆虫；抗真菌肽；毕赤酵母；分泌型表达；抗真菌活性鉴定 Secretive Expression of Insect Antifungal Peptide Genes in Pichia pastoris and Antifungal Activity Assay for the Expressed Products SANG Yan-xia1, 2 1 1 1 3 , DENG Xiao-juan , YANG Wan-ying , LIU Wen-quan , WANG Wen-xian , HUANG Ya-dong4, CAO Yang1, 2 1 2 （Department of Sericulture Science, College of Animal Science, South C