辣椒GMS育性相关候选基因的克隆及表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(16):3264-3276 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.16.012 辣椒GMS 育性相关候选基因的克隆及表达分析 1 1 1 1 2 1 刘 辰 ，马 宁 ，付 楠 ，李 欣 ，郭 爽 ，沈火林 1 2 （中国农业大学农学与生物技术学院，北京 100193； 广州市农业科学研究院，广州510308 ） 摘要：【目的】对辣椒差减文库中挑选出的 4 个育性相关候选基因进行克隆与表达分析，探讨其与辣椒细胞 核雄性不育的关系。【方法】通过半定量RT-PCR 技术分析候选EST 在辣椒可育株和不育株中的表达情况。利用RACE 技术获得 4 个育性相关基因的 cDNA 全长，结合生物信息学方法进行序列比对和蛋白理化性质分析。采用半定量 RT-PCR 检测基因在不同器官（花药、子房、花瓣、萼片和叶片）和花药小孢子不同发育时期（四分体时期、单核 早中期、单核靠边期和双核期）的表达量。【结果】根据比对注释结果，将4 个基因分别命名为CaSEP1、CaPROF、 CaOle e 6 和CaPCP。CaSEP1 全长1 108 bp，编码221 个氨基酸，含有一个MADS 结构域和一个K 结构域；CaPROF 全长767 bp，编码131 个氨基酸，含有一个PROF 结构域；CaOle e 6 全长523 bp，编码85 个氨基酸，含有一个 Ole e 6 结构域；CaPCP 全长563 bp，编码66 个氨基酸。氨基酸序列比对及系统发育树分析表明，CaSEP1 与番茄 SEP1 的氨基酸序列相似性最高，并且亲缘关系最近；CaPROF 与茄科作物烟草和番茄的前纤维蛋白相似性较高，且 与番茄的前纤维蛋白亲缘关系最近；CaOle e 6 与番茄中的对应蛋白存在一定的相似性，亲缘关系也最近；CaPCP 则与茶树中的对应蛋白相似性最高，亲缘关系最近。表达分析显示，CaSEP1 在可育株花药、子房、花瓣等花器官 中表达量一致，且高于萼片和叶片；CaPROF 在可育株花药中的表达明显高于叶片，在其他器官中不表达；CaOle e 6 在可育株花药中的表达明显高于其他器官；CaPCP 只在可育株的花药中表达。CaSEP1 在可育株小孢子不同发育 时期表现为先逐渐升高，至单核靠边期达到最高，而后在双核期表达量明显下降，在不育株中则表现为伴随着小 孢子发育表达量逐渐升高；该基因在四分体时期两材料的表达量相当，在单核早中期和单核靠边期可育株中的表 达量明显高于不育株，而双核期可育株中的表达量比不育株低；CaPROF、CaOle e 6 和CaPCP 均在可育株小孢子发育 后期（主要为单核靠边期和双核期）表达，在不育株花药发育的各个时期均不表达。【结论】4 个候选基因的序列比 对和表达分析结果表明它们与辣椒雄蕊育性关系密切，为揭示雄性不育机理和调控辣椒育性提供了重要信息。 关键词：辣椒；细胞核雄性不育；表达；基因克隆；序列分析 Cloning and Expression Analysis of Fertility-Related Genes for the Genic Male Sterile Line in Pepper (Capsicum annuum L.) 1 1 1 1 2 1 LIU Chen , MA Ning , FU Nan , LI Xin , GUO Shuang , SHEN Huo-lin 1