水稻草状矮化病毒侵染寄主水稻差异表达蛋白的鉴定和分析.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(9): 1725-1734 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.09.007 水稻草状矮化病毒侵染寄主水稻差异表达蛋白的鉴定和分析 丁新伦，谢荔岩，吴祖建 （福建农林大学植物病毒研究所，福建省植物病毒重点实验室，福州 350028 ） 摘要： 【目的】对水稻草状矮化病毒（Rice grassy stunt virus，RGSV ）侵染寄主水稻后其叶片的差异表 达蛋白进行筛选、鉴定和生物信息学分析，为进一步研究RGSV 和寄主水稻互作的分子机制提供线索。【方法】采 用双向荧光差异凝胶电泳（Two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis，2D-DIGE ）和 Image Master 2D platinum 7.0 分析软件寻找差异表达蛋白，MALDI-TOF-MS （Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometry ）鉴定差异蛋白，利用BioTools 软件搜索 NCBI 数据库，寻找匹配的相关蛋白质和功能查询。采用GOminer 软件对差异蛋白进行GO （Gene ontology ）聚类 分析，KEGG （Kyoto encyclopedia of genes and genomes ）数据库分析差异蛋白所参与的生物通路。【结果】建 立了RGSV 侵染与未侵染水稻的叶片双向荧光差异凝胶电泳图谱，RGSV 病株与健株相比，差异倍数大于 1.5 的差 异蛋白质点有173 个，其中表达丰度升高的点有72 个，表达丰度下降的点有 101 个，质谱鉴定了44 个差异蛋白 质点，25 个获得成功鉴定，分属于24 种蛋白质，包括RGSV 的2 种蛋白20.6K 非结构蛋白和P5 蛋白，水稻中的 蛋白推定的核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基、景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶前体、推定的酪氨酸磷酸酶、HAD 超家族水解酶-亚族IA 蛋白变体3蛋白、水稻核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基结合2-羧基阿拉伯糖醇-1,5- 二磷酸复合体、类似C1 结构域蛋白以及其他一些功能未知蛋白和假定蛋白。对已鉴定蛋白的生物信息分析显示， 差异蛋白涉及氮素固定、氮循环代谢过程、含氮化合物代谢过程、单一生物体代谢过程、代谢过程和生物过程等 6 个生物学过程，在生物功能上分属 7 类，包括分子功能、酸胺连接酶活性、酰胺连接酶活性、催化活性、谷氨 酸氨连接酶、连接酶活性和形成C-N 键的连接酶活性，在细胞组件上，差异蛋白分布于不同的细胞位置，涉及细 胞组分、细胞器、细胞、膜结合细胞器、囊（泡）、细胞部分、膜结合囊（泡）、胞内、胞内部分、胞内细胞器、 细胞质、胞内膜结合细胞器、细胞质部分、质体、细胞质囊（泡）和细胞质膜结合囊（泡）。KEGG 通路分析显示， 差异蛋白参与了代谢途径、光合生物固碳反应、碳代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代 谢、氨基酸生物合成、丙酮酸盐代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、谷胱甘肽代谢和氮代谢途径等10 个KEGG 代谢通路。 【结论】RGSV 侵染诱导了水稻差异蛋白质表达，获得了一些与 RGSV 侵染水稻相关的蛋白质分子，差异蛋白涉及 到多个功能类别。其中与氮有关的生物学过程和光合作用过程变化较为明显。 关键词：水稻草状矮化病毒；差异表达蛋白；2D-DIGE；MALDI-TOF-MS Identification and Analysis of Differentially Expressed Proteins of Host Rice (Oryza sativa) Infected with Rice Grassy Stunt Virus DING Xin-lun, XIE Li-yan, WU Zu-jian (Key Laboratory of Plant Virology of Fujian P