桃果实生长素结合蛋白ABP1的组织定位及蛋白表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(5):921-930 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.05.10 桃果实生长素结合蛋白ABP1的组织定位及蛋白表达分析 1 1 2 2 3 余 佳 ，李 阳 ，龚 硕 ，关 伟 ，刘悦萍 1 2 3 （北京农学院植物科学技术学院，北京 102206 ；北京市平谷区人民政府果品办公室，北京 101200 ；北京农学院生物科学与工程学院，北京 102206 ） 摘要：【目的】生长素几乎参与调控植物发育的各个方面。生长素信号转导存在由ABP1（auxin binding protein 1）介导的途径，ABP1 作为一种生长素快速响应蛋白参与调控果实发育等生理过程，其主要存在于正在发育的胚 及胚的周围组织中。本文旨在研究ABP1是否参与桃果实发育过程，探讨其分布与表达特点，为进一步研究桃果实 发育机制奠定理论基础。【方法】以‘24 号’桃果实为研究对象，测定其生长曲线以确定果实发育的 3 个典型时 期。分离不同发育时期的中果皮、内果皮和种子，切块后，一部分样品放入EDAC溶液抽真空后进行戊二醛和多聚 甲醛固定，固定后的样品经脱水和浸蜡处理后用于石蜡切片；另一部分样品液氮速冻后-80℃保存提取蛋白。制 备效价较高的 ABP1 兔源多克隆抗体，应用免疫组织化学定位技术对自然发育状态下不同发育时期桃果实种子和 中果皮中 ABP1 进行定位分析；应用 Western blot 技术分析桃果实中果皮、内果皮和种子中 ABP1 的表达情况。 【结果】根据桃果实生长曲线，将发育时期分为 3 个时期，即第一次快速生长期、硬核期和第二次快速生长期。 免疫组织化学定位结果表明，同一发育时期 ABP1 在种子的不同部位都有分布，且分布信号差异不明显。在种子 发育的各时期，ABP1 在种子的不同部位都有分布，主要分布在种子的内外种皮细胞以及种皮内维管组织周围的 细胞中，且在观测的发育时期内，ABP1 的信号强弱没有明显变化。在种子内、外种皮之间的细胞层中会出现零 散的、呈带状分布的 ABP1 信号。而在中果皮发育的整个时期，ABP1 只在硬核期维管组织周围的细胞中有明显 分布。Western blot 结果表明，中果皮中ABP1的表达在果实第一次快速生长期开始（盛花后41 d）及第二次快 速生长期开始（盛花后76 d）时的表达量最高，在盛花后39 d的表达量最低。种子中ABP1的表达量要高于中果 皮与内果皮。【结论】ABP1 在果实内的分布与表达水平存在组织和发育时期的差异性，ABP1 因子参与了生长素对 桃果实发育的调控过程。 关键词：桃果实；ABP1；免疫组化；表达分析 Tissue Location and Protein Expression Analysis of Auxin Binding Protein ABP1 in Peach Fruit (Prunus persica L.) 1 1 2 2 3 YU Jia , LI Yang , GONG Shuo , GUAN Wei , LIU Yue-ping 1 2 ( College of Plant Science and Technology, Beijing University of Agriculture, Beijin