苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ba3活性区的研究.pdfVIP

中国农业科学 2005,38(8):1585-1590 Scientia Agricultura Sinica 苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ba3活性区的研究 1 1 1 1 2 王广君 ，张 杰 ，吴 隽 ，宋福平 ，黄大昉 1 2 ( 中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100094 ； 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081) 摘要：通过对Cry1Ba3蛋白序列的分析，以及与已知Cry 蛋白比较，设计了6对特异性引物，通过PCR扩增 获得6种不同长度的 cry1Ba3 基因片段。将这些基因片段克隆到pET-21b载体上，导入大肠杆菌BL21 中进行诱导 表达，最终得到 6 种不同长度的 Cry1Ba3 蛋白片段。采用浸叶法检测这些蛋白片段对小菜蛾的杀虫活性，研究结 果表明含有第1～685位和含有第22～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒性，与全长Cry1Ba3蛋白相比，没有 改变；含有第 54～655 位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒力明显降低；而含有第 22～627 位和含有第 85～655 位 氨基酸的蛋白片段完全丧失了对小菜蛾的活性。上述结果表明 Cry1Ba3 蛋白对小菜蛾的活性区在第 22～655 位氨 基酸之间。 关键词：苏云金芽孢杆菌；Cry1Ba3蛋白；活性区；小菜蛾 Toxicity Analysis of Truncated Insecticidal Crystal Protein Cry1Ba3 from Bacillus thuringiensis 1 1 1 1 2 WANG Guang-jun ，ZHANG Jie ，WU Jun ，SONG Fu-ping ，HUANG Da-fang 1 ( State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100094; 2 Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081) Abstract: To determine the minimal active fragment of Cry1Ba3 protein, six fragments of cry1Ba3 gene with different lengths were amplified using PCR with different specific primers. These fragments were cloned into pET-21b vector at BamH I and Sal I restriction enzyme sites, and then introduced into E. coli BL21 strain. After induced with IPTG, the proteins expressed by different fragments were analyzed by SDS, and the results showed that all these truncated proteins coul