jakstat径对bmnpv的感染应答及家蚕作为痛风药物筛选动物模型的研究.pdfVIP

JAK／STAT途径对BmNPV的感染应答及家蚕作为通风药物筛选动物模型的研究 中文摘要 中文摘要 JAK．STAT途径在果蝇中，调节多个发育进程，例干细胞的维持、眼的发育、 胚胎分节配对规则基因(pair-rulegenes)的表达。已发现昆虫在应答细菌和病毒感染 时，JAK—STAT途径被激活，通过调节血球的分化和增殖，参与细胞免疫应答。 家蚕在作为研究痛风药物的动物模型方面有许低成本、无生物危害及与伦理 道德不冲突等诸多优点，更为重要的是家蚕体内尿酸代谢途径与人体内机制相同。 为了探究家蚕JAK—STAT途径在病毒感染应答方面的作用及家蚕作为痛风药物筛 选动物的可行性，我们主要开展了一下两方面的工作。 1．JAK／STAT途径对BmNPV的感染应答 JAK．STAT途径在哺乳类免疫应答中起中心作用，其活性丧失导致B．细胞和 T．细胞功能缺陷，引起严重的免疫缺陷。昆虫的JAK．STAT信号途径在果蝇中首 先被发现，STAT基因在果蝇以及草地夜蛾Sf9细胞中都存在长型和短型两种剪接 nt， 子，BmSTAT-S由1．19外显子拼接而成，BmSTAT．L由1．18外显子和20外显子 拼接而成。除了第11个内含子边界是GC．AG外，其它内含子的边界遵循GT-AG 原则。 为了进一步探讨家蚕JAK．STAT途径抗病毒感染的免疫应答，我们通过非转座 状病毒感染有应答。比较转化BmN细胞和正常BmN细胞对杆状病毒感染的抵抗性， 发现转化BmN细胞的病毒感染细胞比例低于正常BmN细胞，二者之间的感染率相 中文摘要 JAK／STAT途径对BmNPV的感染应答及家蚕作为通风药物筛选动物模型的研究 差8．28％--18．02％；在感染病毒的转化细胞中，伊半乳糖苷酶基因的表达水平比病 毒感染正常细胞的略低，推测这与转化细胞中BmS仉盯的水平(JAK．STAT途径信号) 高于正常细胞有关。然而，在BmN培养细胞中，BmSTA瑾因的过表达尚不足以明 显提高培养细胞的抗病毒感染。研究结果为进一步探讨家蚕JAK．STAT途径在病毒 感染应答方面的作用奠定了基础。 此外，为了进一步探讨过表STAT对家蚕的影响，我们将转基因载体． GO代获得呈绿色荧光的家蚕，用gfp特异性引物可以从荧光蚕的基因组中扩增出 0．7kb的特异性条带，初步结果显示所获得的荧光蚕为转基因家蚕。 2．家蚕作为痛风药物筛选动物模型 痛风是由于尿酸单钠结晶在关节处堆积造成的一种疾病。血淋巴中尿酸含量 过高通常能够导致痛风性关节炎、结节瘤的形成、高尿酸症、尿酸肾结石及肾脏 疾病等疾病的发生。在过去的几十年中，人们一直利用小鼠作为哺乳动物模型来 筛治疗高尿酸及痛风的药物，然而，作为痛风药物筛选的模式动物，小鼠存在一 系列的问题：高成本，生物危害，伦理冲突等，最为重要的是小鼠体内的尿酸代 谢机制与人体不同。因此迫切期望找到另外一种替代动物作为筛选和评估痛风药 物的动物模型。在本研究中，我们以家蚕作为动物模型对痛风药物在降低家蚕体 内尿酸含量及抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)方面的效果进行了评估。结果表明，通 过口服给药的方式，对人类痛风病有治疗效果的药物在家蚕体内也能够同样发挥 其作用。与对照组家蚕相比，别嘌醇能够有效降低治疗组家蚕体内的XOD活力， 且有剂量依存性。与此相反，小苏打则没有降低XOD活力的作用。在连续给药(25 mg／ml／d别嘌醇或25mg／ml／d小苏打)6天之后，1：3服别嘌醇的治疗组家蚕血淋巴 和脂肪体内的尿酸含量降低约90％．95％(P0．01)，口服小苏打的治疗组家蚕血淋 巴和脂肪体内的尿酸含量降低约81％．95％(P0．01)。并且，与对照组相比，两种 治疗组中的家蚕表皮都变得较为透明。因此，我们认为家蚕可以作为小鼠的替代 动物用于治疗痛风的药物筛选。 关键词：JAK／STAT途径；BmNPV；转化细胞；痛风；药物筛选；家蚕 作 者：张晓丽 指导老师：贡成良 ll JAK／STAT途径对BmNPV的感染应答及家蚕作为通风药物筛选动物模型的研究 英文摘要