乳酸芽孢杆菌的离、鉴定及菌制剂制备的研究.pdfVIP

摘要 摘要 抗生素的过度使用导致细菌耐药性和药物残留等问题，危害人类健康。因此，寻找抗生 素的替代物对畜牧业发展具有重要意义。乳酸芽孢杆菌具有乳酸菌和芽孢杆菌的双重特性， 产乳酸的同时还有抗逆性强、耐高温、易储存等特点，比乳酸菌更适于在畜牧业中推广应用。 本试验以仔猪粪便及植物根部土壤为材料，分离乳酸芽孢杆菌，并对分离得到的菌株进行一 系列的特性研究，为乳酸芽孢杆菌制剂应用于实际生产提供一定的理论依据。具体结论如下： 本实验采用普通营养培养基从菌源中分离得到26株革兰氏阳性、有芽孢的乳酸细菌。首 先对分离到的26株菌进行抑菌性能试验：筛选出对仔猪黄白痢病源菌有较强抑制作用的15 株菌；其次，采用pH1．8的培养液处理培养了72h的15株菌的菌液2h，经体外耐酸试验筛 选，得出8株菌，此条件下表现出良好耐受性且具有较高的活性；最后，在0．3％胆盐浓度的 液体培养基中处理2h，筛选出活菌数及存活率较高的菌株Y4、Y6、Y13、Y160 将目的菌株接种在普通营养培养基上37℃培养24h，观察其特征，且在相差显微镜下观 察其形态特征为：细胞呈杆状，且形成端生椭圆形芽孢，芽孢囊不明显膨大，接触酶阳性， 初步确认4株菌属于芽孢杆菌属；然后，通过生理生化试验初步确定Y4、Y6、Y13、Y16菌株 属于乳酸芽孢杆菌。其中，Y4、Ys是从仔猪粪便中分离得到，初步确认为凝结芽孢杆菌，Y1” Y16是东北农业大学大学土壤中分离，初步确认为嗜热脂肪芽孢杆菌。 实验二，将目的菌株Y4、Y6、Y13、Y16及市售枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的产消化酶 及产酸能力对照，结果表明：Q·淀粉酶产量由低至高为：Y16Y13枯草芽孢杆菌Y4地 衣芽孢杆菌Y6(47．99 Y4地衣芽孢杆菌Y16(Y6(259．48mmoi／L)。 实验三，通过测定4株目的菌株混合培养的生长曲线得知乳酸芽孢杆菌的生长稳定期即 活菌数峰值出现在30小时，芽孢数峰值出现在36小时：通过液体发酵试验得出液体培养基 K2HP04 O．01％，NaCl 0．2％，MnS04‘H200．002％，MgS04’7H20 100ML。在此培 0．1％，H20 养基组成下进行发酵，发酵液活菌数可达1．95×1012cfu／mL。 实验四，益生菌制剂的制备过程中，50C低温烘干乳酸芽孢杆菌制剂所得有效活菌数最 多；此外，各类菌制剂的载体成分及适宜比例为稻壳：豆粕=1：3：通过保质期测定(即益生 菌制剂中的有效活菌数)得出真空包装菌制剂的180d有效活菌数，显著高于非真空包装的有 效活菌数。 关键词：乳酸芽孢杆菌：分离：鉴定；菌制剂制备；有效活菌数 Lactic of on Study andits Bacillus Acid Preparation Abstract useofartificialantibioticsis toamarkedincrease Thereisconcernthattheextensive leading have inantibioticresistance residualantibioticsincarcasses amongpathogens．Furthermore，certain of