内蒙古白绒山羊蛋白14(k14)基因启动子多态性及其与绒毛性状关联性.pdfVIP

摘 要 角蛋白 14 （Keratin 14，KRT14，K14）作为哺乳类动物绒毛结构蛋白，与 角蛋白 5 成对表达于表皮基底层细胞、绒毛及毛囊外根鞘细胞内,是覆层鳞状上 皮的生物标记物。因此我们对内蒙古白绒山羊角蛋白 14 启动子进行了相关研究。 试验一：内蒙古白绒山羊角蛋白 14 启动子的克隆和分析。本试验以内蒙古 白绒山羊DNA 为模板，参照牛的角蛋白 14 序列设计和合成引物，通过 PCR 扩增 获得长度为 2834bp （登录号为 JQ063036）,包括启动子区 2631bp 和结构基因第 一外显子区 203bp 的内蒙古白绒山羊角蛋白 14基因片段，对角蛋白 14基因启动 子结构进行了生物信息学分析，并与人和牛角蛋白 14 启动子序列做了比对。结 果：山羊角蛋白 14 启动子结构与人角蛋白 14 启动子只含有 Sox-5，GATA-1， GATA-1/2 结合位点等 3 个共同的转录因子结合位点；但与牛的有较高的相似性， 含有 Sox-5，SRY，Cdx A，Myo D，MZF1，GATA-1/3，Nkx-2 结合位点等 7 个共同 的转录因子结合位点。 试验二：内蒙古白绒山羊角蛋白 14 基因单核苷酸多态性分析。①在对内蒙 古白绒山羊角蛋白 14 启动子序列克隆的基础上，首先以20 只山羊混合DNA 为模 板通过克隆测序寻找多态位点，结果发现引物 D2 和 D4 扩增片段-421 和-1838 处出现套峰。②在-421 和-1838 处分别设计引物 S1 和 S2，以 150 头内蒙古白绒 山羊为研究对象，应用 PCR-SSCP 技术和 DNA 测序技术检测内蒙古白绒山羊角蛋 白 14 启动子的分子变异。结果：引物 S1 扩增产物有 AA、AG、GG 3 种基因型； 引物 S2 扩增产物有 CC、CT、TT 3 种基因型；克隆测序分析，发现-421 和-1838 2 位点分别发生了 A→G 和 C→T 的碱基突变。③群体遗传学表明：经 χ检验。-421 （A→G）和-1838 （C→T）位点上的 SNP 均处于 Hardy-Weinberg(P0.05)平衡状 态，且均属中度多态。-421 （A→G）位点 AA 型个体的绒厚显著低于 GG 型和 AG 型个体，GG 型个体的绒长显著高于 AA 型个体；-1838 （C→T）位点TT 型个体的 毛长和毛细度均显著高于 CT 型个体和 CC 型个体，其中 TT 型个体的毛长相对与 CT 对 CC 型个体更显著，毛细相对于 CC 对 CT 型个体更显著。 关键词：内蒙古白绒山羊；角蛋白 14 启动子；序列分析；多态性；绒毛性状 Inner Mongolia Cashmere Goats Keratin 14 (K14) Gene Promoter Polymorphisms and Their Correlation with Wool Trait Abstract Keratin 14 (keratin 14, K14) is a one of the family of keratin expression in epidermal basal cells and hair follicle outer root sheath cells and II keratin K5 pairs children are considered biomarkers of the overlying stratified squamous epithelium matter. The study found that the gene promoter regulates the transcription start and rate, thus affecting the expression of the gene, so we carried out relevant research on the Inner Mongolia Cashmere goats keratin 14 promoter. Test