美洲商陆抗病毒白基因在毕赤酵母中的表达.pdf

中文摘要 植物病毒病是农作物的主要病害之一，它危害严重，给农业生产带来的巨大经济 损失。长期以来，人们一直在探索防治病毒病的方法，但到目前为止还未研制出有效 antiviral 防治试剂。许多研究发现美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweed 物病毒具有良好的控制效果。然而，自然界天然存在的PAP资源有限，很难大规模利 用。用生物反应器，低成本大量生产PAP，是解决这一问题的有效方法之一。目前已 经有人在这方面做出了尝试，但蛋白表达产量还不高。Francis等在巴斯德毕赤酵母 10—12mg／L。中国农科院植保所植物病毒实验室陈定虎博士成功的筛选到P pastoris 将其应用于植物病毒病的防治。然而，Muts菌株由于发酵周期长，甲醇率利用低， 并不适用于实际的大规模生产。 本研究将含有N末端信号肽和c末端毒性区缺失的PAP基因的表达载体 I酶切线性化后，通过电击转化整合P pPIC9K．P用Sal 的重组菌株。 TMV病毒侵染有明显的抑制作用，且它们的抗病毒活性没有显著的差异。 通过摇瓶培养初步摸索了诱导时间、甲醇浓度、培养基pH值等培养条件对Mut+ 天后PAP在培养液中积累量达到最高水平，延长培养时问会导致产量下降；在102／L PAP的表达量都维持在较高的水平。 关键词美洲商陆抗病毒蛋白巴斯德毕赤酵母Mut+重组予Mut8重组子诱导表达 ABSTRACT 1)lantvirus is diseaseone disease．It anddoes primary distributes harm crop wildly great to of searchafter and to c1．1revirus economy yield．People waysprevention agriculture for time diseases butnot studies that effective revealed long develop reagentyet．Many virus in is antiviral control PAPnature pokeweedprotein(PAP)Canplant effectively．But limitedwhich not to PAPone could bioreacter is applycosmically．Usingproduce massofPAE this is efficaciousto a Someonetried butthe low．Francis wayget