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四川农业大学硕士研究生论文 西瓜花药和小孢子培养技术研究 摘要 在西瓜单倍体育种技术中，通过离体培养诱导西瓜花药产生单倍性胚性愈 伤组织，进而诱导产生胚状体和单倍体再生植株，能简化花药培养的过程，加 快单倍体育种的进程。西瓜研究主要集中在茎尖培养、原生质体培养、体细胞 杂交、基因转化和诱导体细胞无性系变异等生物技术途径上，在西瓜上生物技 术的应用途径也在不断拓宽，其研制和开发有了长足的进展。但是通过花药培 养进行西瓜的单倍体育种仍有很大的局限性。 本实验以北京蔬菜研究中心的ZW22、ZW2 271、331号(zw系列属于京欣系列瓜种，其余的均是野生品种)具有较多优良 性状的F。代九种不同基因型西瓜品种为材料，用DAPI荧光染色法检测花粉发育 的时期，确定花蕾发育和花粉发育时期的关系，分别以花蕾的低温处理和接种 花药的高温预培养，光暗的对比培养，不同蔗糖浓度的培养以及12种不同激素 组合的诱导培养基，探索西瓜花药发育途径和培养过程中的各种影响因素；通过 观察花药小孢子的最佳发育时期，优化花药预处理的条件，同时对于不同状态 的西瓜花药愈伤组织进行分化处理，主要取得了以下的结果。 1、在西瓜花药诱导愈伤组织的培养中，开花前期的花药，愈伤组织诱导频率较 高，且愈伤组织生长迅速、质地致密，具有良好的分化潜力。 2、西瓜花药培养的最佳时期是单核靠边期到双核期，在试验中以花药的色泽和 花蕾的大小作为初步确定小孢子发育时期的标志。 3、西瓜花药培养受多种因素的影响，既包括由植株本身所决定的基因型差异、 小孢子的发育阶段、花蕾的预处理及供体植株的生理状态等内在条件，也包括 基本培养基成分～糖类、激素及培养条件等外界因素。研究表明，花蕾4C处 理2d再将接种后的花药放入4℃冰箱预处理2d的诱导率最高，达到了57．84％。 高温预处理的褐化率很高，不易导出绿色致密的愈伤组织。黑暗条件比较容易 产生愈伤组织，但是愈伤组织的质地很疏松，颜色发白；光照条件下产生愈伤 组织比较慢，但质地很致密，颜色绿。在对ZW24和331号两品种的对比试验中， 野生种331号在该培养基上愈伤组织诱导率达到了68．42％。 四川农业大学硕士研究生论文 4、建立了西瓜花药愈伤组织诱导的实验体系。确定了西瓜花药愈伤组织诱导的 ℃2d的处理，为基因转化、细胞培养等方面的研究提供有用的参考数据。 5、固体培养时，蔗糖浓度609／L的培养效果最好；在花药愈伤组织的增殖培养 中加入三十烷醇有利于提高绿色愈伤组织的诱导率。将长势较好的愈伤组织转 到Ms+三十烷醇2．Omg／L+6-BA 0．5mg／L上，76*／,的愈伤组织再生出丛生芽。 丛生芽在MS+O．5mg／L的IBA上长出了根。 6、游离小孢子培养的过程中，早上采集花蕾其花粉活力较强。游离小孢子不同 温度处理以低温4℃处理效果最差，高温热激36℃处理4d的效果较好。不同 比较，小孢子脱分化率最高的品种是271号。小孢子进行热激处理后，在1／2NLN 液体培养基上培养，小孢子膨大，分裂，形成不规则的细胞团和肉眼可见的愈 伤组织颗粒。 关键词：西瓜，花药，愈伤组织，培养基，基因型； 四JJlge业大学硕士研究生论文 Watermelonanther cultureand microspore technology research LiJuan DirectedProf．LiHuanxiu by of and (CollegeForestryHorticulture，SichuanAgricultural University， Ya’an，Sichuan，China，625014) Abst