家蚕转绿色荧光白-蜘蛛丝蛋白融合基因的研究.pdf

中文摘要 家蚕转绿色荧光蛋白-蜘蛛丝蛋白融合基因的 Ⅰ 中文摘要 家蚕转绿色荧光蛋白-蜘蛛丝蛋白融合基因的 中文摘要 为了改善蚕丝的机械性，本研究以piggyBac 转座子载体为骨架，构建了含有 家蚕丝素重链蛋白的 N-端区域(NTD)-绿色荧光蛋白(eGFP)-蜘蛛丝蛋白 [A S ] - 2 8 28 重链蛋 白的 C- 端 区域 (CTD) 融合 基因 表达 元件 的打 靶载体 pXL-NTD-eGFP-Spider-CTD ，同时根据丝素重链基因内含子区域((AF226688: 63011-63025 和63052-63066)的DNA 序列，设计组装了TALENs 序列，构建了靶 向丝素重链基因内含子区域的TALEN 9- 10 载体；SURVEYOR 和 lacZ 中断法证 实 TALEN 9- 10 载体在家蚕卵母细胞株(BmN cells) 中的效率约为 13.95%。将 TALEN 9- 10 载体与打靶载体pXL-NTD-eGFP-Spider-CTD 混合，通过真空电穿孔 技术，导入家蚕初产卵，筛选获得G0 代转基因家蚕。PCR 检测结果显示，G0 代 转基因家蚕蚕蛾基因组中有报告基因eGFP(enhance green fluorescence protein gene) 的存在；Western Dot Blot 检测转基因家蚕蚕茧蛋白样品，证实转基因家蚕表达了 家蚕丝素重链蛋白的 N- 端区域(NTD)- 绿色荧光蛋白(eGFP)- 蜘蛛丝蛋白 [A S ] Spider-重链蛋白的C-端区域(NTD)融合基因；ELISA 定量检测显示，eGFP 2 8 28 在转基因家蚕蚕茧蛋白可溶样品中的含量约为 4%(摩尔比)，推测表达的蜘蛛丝蛋 白Spider [A S ] 在可溶样品中的摩尔比含量也为约4% 。外源DNA 在家蚕基因组 2 8 28 的定位分析显示，外源DNA 定位于家蚕基因组的23 号染色体，打靶载体在转基 因家蚕基因组中的整合方式为随机插入，并非由TALEN 技术介导的定点插入；机 械性能检测结果显示，G0 代转基因家蚕蚕丝的最大极限拉力(Max. Stress)提高了约 40-50%，最高的最大极限拉力约为700MPa, 平均值约为620MPa 。挑取G0 代茧丝 最大极限拉力(Max. Stress) 最高的转基因蚕杂交传代，得到G1 代转蛛丝基因家蚕， 检测结果显示，这种优良的机械性能特征能遗传至G1 代转基因家蚕。研究结果为 进一步通过改善蚕丝的机械性能提供了新线索。 关键词：家蚕，转基因，TALEN ，蜘蛛丝，蚕丝，机械性能 作 者：张晓丽 指导老师：贡成良 Ⅰ 英文摘要 家蚕转绿色荧光蛋白-蜘蛛丝蛋白融合基因的 The study on transgenic silkworm with eGFP-Spider [A2S8] protein in the fiber 28 Abstract In our