马铃薯y病毒h-pro和甘蔗花叶病毒cp基因的克隆、原核表达与抗血清制备.pdfVIP

马铃薯y病毒h-pro和甘蔗花叶病毒cp基因的克隆、原核表达与抗血清制备.pdf

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马铃薯y病毒h-pro和甘蔗花叶病毒cp基因的克隆、原核表达与抗血清制备

中文摘要 血清学方法是植物病毒诊断和鉴定病毒的重要方法,在植物病毒的 检疫、预测预报、植物病毒的定位、增殖、移动和基因功能等方面研究 中也发挥着重大作用。以往用提纯的病毒粒体为抗原制备抗血清存在一 些缺陷,如有些病毒含量非常低、不易提纯,所得抗血清中常含有寄主 蛋白的抗体等。通过基因工程技术使病毒的基因在原核细胞中表达,以 表达产物作为抗原制备抗血清,可以部分解决以上问题。本研究主要结 果如下: virus y,PVY)N和O株系分离物的 1分别以马铃薯Y病毒(Potato HC-Pro基因, RNA为模板,通过RT-PCR克隆到PVY“、pVyo 并对其进行了序列分析。测序结果表明两个HC—Pro基因全长均为 1368 nt,编码456个氨基酸。两个基因的核苷酸同源性为99.71%, 氨基酸同源性为99.56%。 体pETHC,使HC.Pro基因在大肠杆菌中得到高效表达。用原核 表达的HC.Pro免疫家兔,获得了HC-Pro的抗血清。 3应用RT-PCR和特异引物从泰安采集的感染矮花叶病的玉米植株 总RNA中扩增到一个大约1 kb的片段,与克隆载体pUCl8连接 后通过热激法转化大肠杆菌DH5ct。序列测定和结果的表明,泰安 地区玉米花叶病由甘蔗花叶病毒(SCMV)引起,该病毒泰安分离 安分离物和国内报道的SCMV分离物(特别是山东分离物)有很 高的氨基酸序列同源性,而与其它病毒的同源性较低。 大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,表达蛋白约占总蛋白的 15%。用此蛋白制备了效价高、专化性强的抗体。 关键词:马铃薯Y病毒;辅助成分一蛋白酶;甘蔗花叶病毒;外壳蛋白基 因;克隆;原核表达 Abstract methodshavebeen tobesensitiveand in Serological proved specific and also rolesin great detectingidentifyingviruses.Theyplayed studying ofviral ofviral localization genes,transmission proteins,functions virus—host wereseveral mechanism,andinteractions.However,there for studies.For viruses disadvantagesserologieal example,some potential at di伍cultto1)e existedin lOWconcentrationandwere very plants purified. tohost antiseracontained

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