长穗偃麦草高分量谷蛋白亚基的鉴定及基因编码区分子克隆.pdf

长穗偃麦草高分子量谷蛋白亚基的鉴定及基因编码区分子克隆 andmolecular of molecular subunits Identificationhigh weightglutenin from their Elytrigia sequences cloningcoding 摘要 偃麦草属是改良小麦产量和品质性状的重要基因资源。具有抗锈病、赤霉 病和白粉病的多种抗性基因，亦具有大穗、多花、抗低磷营养胁迫、抗寒和抗 elongata)是该属的一个二倍体 旱等诸多优良性状。长穗偃麦草(Elytrigia 物种，前人利用SDS—PAGE分析方法从中鉴定出高分子量谷蛋白亚基，通过培育 染色体代换系的方法证实其编码基因位于lE染色体长臂。但有关偃麦草物种高 分子量谷蛋基因分子序列的报道还非常少见。为认识该物种所具有的高分子量 谷蛋白，对其基因编码的亚基进行了鉴定并克隆和测序了基因编码区。所获得 的主要结果如下： 1．长穗偃麦草高分子量谷蛋白亚基组成分析 应用SDS—PAGE检测了8份二倍体长穗偃麦草的高分子量谷蛋白组成，检测 结果表明均含有2-4个不等的亚基。选取其中i份材料P198526为重点研究对 象，分别检测了33粒种子，发现有2-4条迁移率各异的高分子量谷蛋白亚基， 但以3和4条的居多，显示该种子的高分子量谷蛋白亚基组成因共显而表现为 杂合型。 因编码区克隆及序列特点 以长穗偃麦草材料P198526单一植株DNA为模板，扩增获得4个分子量各 别的高分子量谷蛋白亚基基因编码区片段，大小分别为1．5。1．8，1．9和2．Ikb。 为Y型．Eel．9和Ee2．1为x型基因的编码区。 Eel．5亚基全长编码区核苷酸长度为1492bp，可编码467个氨基酸残基的 成熟蛋白。是目前明确的编码区最短的y型高分子量谷蛋白亚基之一，除具备 Y型高分子量谷蛋白亚基的典型特征外，其N保守端较其它同类亚基多出1个 氨基酸残基，为105个。其序列结构与DylO亚基十分类似，但其重复区中部有 一额外的半胱氨酸，在所有Y型亚基重复区末端都具备的一个半胱氨酸则消失 了。 Eel．8亚基全长编码区核苷酸长度为1788bp，可编码573个氨基酸残基的 成熟蛋白。具备Y型高分子量谷蛋白亚基的典型特征。 Eel．9在其编码区内部存在一个提前终止密码子。不能编码可表达的成熟 蛋自。 Ee2．1亚基全长编码区核苷酸长度为2082bp，可编码670个氨基酸残基的 成熟蛋白。除具备X型高分子量谷蛋白亚基的典型特征外。在其重复区中部有 一额外的半胱氨酸，与Dx5重复区中额外半胱氨酸的部位不同。 由于所获得的来源于二倍体长穗偃麦草的高分子量谷蛋白基因编码区序列 与己报道的小麦同类基因在分子序列上存在较大差异，特别是N端保守区氨基 酸数目的增加，重复区内与二硫键形成至关重要的半胱氨酸的增加、减少以及 位置的改变将可能直接导致这些亚基在小麦面筋网络的形成过程中有不同寻常 的功能。因此，确有必要对这些亚基进行深入研究以期认识其在小麦品质改良 中的重要作用。 3．长穗偃麦草Ee染色体组高分子量谷蛋白基因与小麦同源基因的聚类分析 N端氨基酸序列聚类分析显示，Ee染色体组编码的Y型高分子量谷蛋白因 Eel．8与Ay基因以较高的支持率聚类在一起。而Eel．5则与A、B和D染色体 组编码的亚基的分歧较大，以较高的支持率单独聚类为一枝。 而Ee染色体组编码的X型高分子量谷蛋白基因Eel．9(假基因)和Ee2．1与 小麦B染色体组编码的基因以较高的支持率聚类在一起。 关键词：偃麦草属(Elytrigia)、长穗偃麦草(Eiytrigia elongata)、高分子 量谷蛋白亚基、分子克隆 2