一种河口沉积物总DNA的高效提取方法.pdfVIP

第32卷 第3期 江 西 科 学 V01．32 No．3 2014年 6月 JIANCXI SCIENCE Jun．2014 文章编号 ：1001—3679(2014)03—0323—05 一 种河 口沉积物总 DNA的高效提取方法 王东升，黄江丽，谭胤静，田晓娟，张志红，丁建南 (江西省科学院生物资源研究所，330096，南昌) 摘要：研究主要 目的是从河 口沉积物中提取高质量DNA，为后期应用分子生物学技术研究河 口沉积物微生物 功能基 因及种群分析等奠定基础。用CTAB—SDS一冻融法，样品预处理一CTAB—SDS一冻融法，样品预处理一CTAB— SDS一冻融一DNA重沉淀法和土壤总 DNA提取试剂盒法提取 3种河 口沉积物总DNA，通过 DNA琼脂糖凝胶 电 泳、DNA纯度和浓度及 16SrDNA的 PCR扩增分别对这4种方法进行评价。结果显示，样品预 处理一CTAB— SDS．冻融法一DNA重沉淀所提取的DNA质量最高，可以用于后续的分子生物学研究。 关键词：河口沉积物；环境微生物；DNA提取和纯化 ；方法优化 中图分类号：Q939．94 文献标识码：A An EfficientM ethodforDNA Extraction from EstuarineSedimentsM icroorganism WANGDongsheng，HUANGJiangli，TANYinjing，TIANXiaojuan，ZHANGZhihong，DINGJiannan (InstituteofBiologicalResources，JiangxiAcademyofSciences，330096，Nanchang，PRC) Abstract：Themain purposeofthisresearchwastoextracthighqualityDNA rfom estuarinesedi— mentsforstudyingmicrobialfunctionalgeneandpopulationanalysisbymoleculebiologytechnology． Weextracted the totalDNA rfom 3kindsofestuarine sedimentswith CTAB—·SDS-·rfozen-·thawing-- method，sample pretreatment-CTAB—SDS—rfozen-thawing-method，sample pretreatmcnt—CTAB—SDS— rfozen—thawing—precipitateDNA-methodandsoiltotalDNA ExtractionKit，andassessedtheseDNA extractionmethodsby DNA agarose gelelectrophoresis，DNA purity and concentration aswellas PCR amplification16SrDNA gene．TheresultsshowedthatextractedtotalDNA bysamplepretreat— ment--CTAB-·SDS-·rfozen-·thawing—-precipitateDNA-m·ethodhadthehighestqualityandcouldbeused ofrsubsequentmoleculebioloyg studies． Keywords：estuarinesediments；environmentalmicrobioloyg ；DNA extractionandpurification，meth— odoptimization o引言 委 近些年来，分