枣选择性扩增微卫星体系的建立及优化.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(2):371-379 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.02.018 枣选择性扩增微卫星体系的建立及优化 马庆华，王贵禧，梁丽松 （中国林业科学研究院林业研究所/ 国家林业局林木培育重点实验室，北京 100091 ） 摘要：【目的】建立和优化枣的选择性扩增微卫星（SAM）技术体系，丰富枣群体遗传学研究的方法，同时为 枣利用 SAM 法开发 SSR 引物提供技术参考和模板。【方法】以冬枣、大荔龙枣和金丝小枣为试材，采用 CTAB 法提 取样品 DNA，对 SAM 试验过程中的酶切-连接、抑制性扩增、预扩增、选择性扩增等关键因子进行研究。【结果】 利用 Pst Ⅰ和Mse Ⅰ双酶切系统，分步法进行酶切-连接是后续试验成功的关键，抑制性扩增（20.0μL 体系）模 板取酶切连接液2.0μL，预扩增和选择性扩增（20.0μL体系）的模板分别取上步扩增的稀释产物各2.0μL；抑 制性扩增和预扩增反应中，ExTaq取0.5 U，反应25个循环，产物稀释20 倍进行下一步扩增；选择性扩增采用前 6个循环中退火温度梯度降低（每循环降低1℃）的反应程序，体系中可将 ExTaq用量增加到1.0 U以保证酶的保 真效果。【结论】试验利用优化后的反应体系，选用16个Mse Ⅰadapter+NN primer和SSR primer（PCT）组成引 6 物对进行筛选，获得了谱带清晰、分辨率高、多态性丰富的电泳图谱。该研究结果为利用 SAM 技术开展枣的亲缘 演化、遗传多样性分析及SSR引物开发等方面的研究打下了基础。 关键词：枣；选择性扩增微卫星（SAM）；体系建立；优化 Establishment and Optimization of Selectively Amplified Microsatellite (SAM) Analysis System on Chinese Jujube (Zizyphus jujuba Mill.) MA Qing-hua, WANG Gui-xi, LIANG Li-song (Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry/Key Laboratory of Tree Breeding and Cultivation, State Forestry Administration, Beijing 100091) Abstract: 【Objective 】 The objective of this study is to establish and optimize the SAM (selectively amplified microsatellite) analysis system, enrich the research methods in population genetics of Chinese jujube and provide reference and templets for SSR primer development using SAM in Chinese jujube. 【Method 】 High-quality genomic DNA was isolated by improved CTAB method from leaves of differen