牛气管防御素基真核表达载体的构建及体外抗菌功能研究.pdfVIP

摘要 antimicrobial tracheal 牛气管防御素(bovine 管黏膜上皮细胞中分离得到的一种Rl离子型的抗菌活性小肽，体外实验表明bTAP具有广谱抗菌活 性，对细菌与真菌均具有杀伤作用，但机理不同丁．抗生素，不易产生耐约菌株。因此，在医药、 食品、农业等领域具有很高的应用价值。利用基因：』：程技术培育转防御素基冈动物已经成为人们 研究的热点。 本研究采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增剑114bp的TAP基因，分析序列后根据火肠杆 KD，在大肠杆 表达，SDS．PAGE与Western．Blot检测重组融合蛋白成功表达，蛋白分子量为24 菌中可以高效表达，滤纸片法检测表达目的蛋白具有明显的抗金黄色葡萄球菌的活性，并研究组 TAP，脂质体法转染293T细胞进行瞬时表达，斑点ELISA检测结果为重组真核表达载体成功表 达。采用胶原酶消化法和组织块贴附法培养2．3月龄牛胎儿成纤维细胞，细胞状态良好，传代稳 定。该实验为构建稳定表达牛气管防御索的胎儿成纤维细胞系奠定了基础