84k杨再生和传转化体系的研究.pdfVIP

摘要 二一一一 ————————一一 84K杨是韩国培育成功的银白杨和腺毛杨(Populusalba×Populus 性系，因其生长快、繁殖迅速等特点逐渐成为杨树基因工程的重要受体树种。本文以 84K杨为实验材料，研究并建立了两种不同的高效再生及遗传转化体系，结果如下： 出芽再生体系进行实验优化，得到的高效再生培养基为：MS培养基+0．002TDZ mg·L。1 +0．5 6-BA+0．1 mg·Ld 个不定芽； (2)利用培养条件将脱分化与再分化过程分开，通过不同激素及培养基对84K杨 进行再生实验，得到一个高效的经愈伤组织途径的再生体系。84K杨叶片在黑暗条件下 诱导愈伤组织的高效培养基为MS+0．5 KT+0．2 mg·L4 KT+0．1 mg·Ld mg·L一2,4．D；愈伤组织诱导出芽的高效培养基为WPM+0．05mg·L‘1 TDZ+0．5 最高达到98％，平均每个愈伤组织可出芽约30个； (3)84K杨外植体在Kan浓度为20 mg·LJ的直接诱导出芽培养基和诱导愈伤培养 基上时诱导出芽和诱导愈伤的能力被完全抑制；愈伤组织在Kan浓度为20 mg·L。1的愈 伤组织诱导出芽培养基上时分化出芽能力被抑制；浓度为250 mg·L。的Cef可有效抑制 农杆菌生长，且对外植体诱导出芽和愈伤组织以及愈伤组织诱导出芽不产生影响； 养时间、菌液浓度、侵染时间和共培养时间4个因素的作用效果。结果表明，侵染前外 植体不能进行预培养，经预培养的外植体与不经预培养的外植体的分化能力有很大差 佳转化方案。该遗传转化体系转化率可达到28％，但仍存在假阳性植株，假阳性植株所 占比例达到35％； (5)建立了84K杨经愈伤途径的遗传转化体系。参考上一个方案的优化结果，对 外植体进行侵染后，将外植体置于诱导愈伤组织培养基上进行选择培养，得到抗性愈伤 后对愈伤组织进行出芽诱导。该转化体系的转化率可达到33％；未检测出假阳性植株。 关键词84K杨；外植体；分化出芽；愈伤组织；遗传转化 万方数据 Abstract Abstract 84Kisthesuccessfulcultivatedcloneof albaX Popular hybridal PopulusPopulusglandulosa． has an It become becauseofitsfast importantreceptorspecies growth，quick featuresinthe our utilizethe 84Kasthe populusgeneticengineering．Inresearch，we Popular establishtwodifferent and material，and experimental high-efficiencyregeneration transformation systems． onthe the for 84K (1)Based research，we