实时荧光rt-cr快速检测高致病性禽流感病毒（hpaiv）h5亚型.pdf

摘 要 高检测方法的敏感性和特异性。根据HPAIVH5血凝素(HA)基因保守区序列，合成了70对引 物和4条探针，经过引物、探针筛选优化、反应体系、无机离子浓度、反转录酶筛选及浓度优化、 Taq酶浓度优化等一系列的试验，建立了直接从禽肉组织中快速检测高致病力禽流感病毒H5亚型 的实时荧光RT—PCR方法。以4株H5亚型高致病力禽流感病毒的感染性尿囊液经稀释后进行荧光 感病毒、鸭瘟病毒、鸭传染性肝炎病毒进行检测，结果均为阴性。表明：建立的检测方法敏感性 高、特异性强。与国际标准方法一国际兽疫局(oⅢ)确定的鸡胚病毒分离相比，将检测时间从原来 最短需要21天大大缩短为4小时。 部分未表现临床症状。对死亡的肉鸡、SPF鸡和肉鸭的心、肝、脾、肺、肾、气管、直肠、骨髓、 的敏感性为1 H5 的敏感性为阴性～1矿。经统计学分析，两种检测方法敏感性差异不显著。对人工感染HPAIV 未表现出临床症状的鸭分别在不同时间扑杀，取肌肉组织和脏器进行荧光RT-PCR检测，同时进 行鸡胚病毒分离对比实验，结果为：感染后3天，鸭组织脏器中病毒量高用两种方法基本都能检 出