基因修饰的鸡新疫病毒flt;,48gt;elt;,9gt;株hn基因dna疫苗的构建及其免疫效力的评价.pdf

摘要 为了寻求一种更加有效防控鸡新城疫病毒的途径，我们构建了NDnrF4B岛株的HN基因修饰的 核酸疫苗，并通过体外表达实验和sPF鸡免疫实验对其进行了评估。 本研究利用密码子使用频率表，将NDⅣF4函株的HN基因的密码子全都替换为鸡体内偏嗜性 密码子，同时在HN基因的5’端加上同样已替换密码子的禽流感病毒HA【A，Go∞砌啪gd∞∥l／96 射三周龄sPF鸡，PBs设为空白对照组；一免后三周以相同的剂量加强免疫，二免后以103EⅢ∞NDⅣ 的F4sE9强毒株进行攻毒，计算发病率、死亡率、以及排毒情况。免疫及攻毒前后每周采集血清和外 周血淋巴计算m抗体和细胞因子口FN吖和Ⅱ，18动态变化情况。 体外表达实验结果显示，与未经修饰的HN基因相比，修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明 显提高，并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量。在随后 的sPF鸡免疫实验中，实验结果显示，在攻毒前只有修饰过的HN基因免疫组的Ⅲ抗体滴度超过了 的保护效率，而p、H矾和p、，c胡N只有50％，空载体和空对照未能产生保护效力。我们从m4吖 和Ⅱ，18检测的结果可以看到，p_v-sop证玳和州roSop心N诱导的细胞免疫水平高于其它免疫组。 除空白组以外，其余的免疫组DFN吖和Ⅱ，18表达水平在一免后一周升高，到二免一周达到最高峰， 很快下降，攻毒后有很快上升但是没有超过二免一周的水平。在此过程中，我们发现，载体中包含 q，∞DN序列时可以诱导较高水平的细胞免疫。 关键词：NDv，DNA疫苗，密码子优化，信号肽，免疫效力 AbSt怕Ct Toseek con订0lNDV vacci地of a慨way协珥咖t锄d e伍ci∞ny骶∞地咖c剐meDNA 础髓ed NDV陋s蛐麒雕and删nle商ci唧of恤DNAmcine蛐to vi缸Dandvivo． 懿perjme廿坞in me c∞donusage wem础咖位NDV聃s劬矾g黜accordjn咖州mj西ngand峨 No：AF th鹤∞∞bry 144305】j珏 l∞d盯∞q眦虹cc郴00∞，G啪n星栅∥l／96015N1)HAg∞e，Ac∞韶ion ∞r咖d*m麟modi丘edg曲嚣∞dthel玳ge嘴thatsi刚即dde硼hockedo仃n∞edsop征矾 and op心．m岫删：S删，叩吲and恤删g∽ofNDvF_幽蛐w∞ins删 幽1he Vectorp嗽1andVectof脚l伽血111ding Which珊th锄totrans蠡斌293Tcellsand andj丑d慨t血蛐mo丑u优嚣c∞∞ d晾吼ed缸Wbc-blot血g test SPF af嘧48h咄墨．Subse印斌嘶Sj】【gM驴of血e洲∞hld ofpWⅨ1，p呦Ⅸ1—cpQp、L丑N，p、，c．HN，pv-Sop雠矾绷dp、^DSOP旺玳∞吐把q岫幽ceps删州y’ c∞们l 2慨婶蝴me wi也the s黜do豫Q【ic蛔s Ⅶ晒Ⅱado乌boos噼ed w∽chall锄gedin血锄u蝴】larly啦1000EⅢ靳 NDV眦9 s扛aina矗盯卵∞日dim加mizado也mm饥bidi够m m删mun in 血a衄缸ted293T∞11s触ddete吼ed w廿e