小儿肾母细胞瘤型疫苗的研制.pdf

摘 要 目的：对小儿肾母细胞瘤新型疫苗进行初步探索、研究，为该肿瘤的治疗以及替 代手术后的放、化疗提供新的切入点。 方法：首先对必需的实验材料进行制各和验证，包括抗体的制备和肿瘤细胞模型的 采用构建DNA疫苗的方式，运用Balb／c小鼠免疫检测的方法筛选最佳的抗原表位肽， 为小儿肾母细胞瘤新型疫苗的研究奠定基础。用筛选得到的表位肽HLA-A*2402构建 DNA疫苗，为最终新型疫苗的研制做对照。采用基因重组技术分别克隆编码小儿肾母 病毒表达系统对融合蛋白进行表达，通过电镜观察得到的融合蛋白呈病毒样颗粒 蛋白，作为该肿瘤治疗以及替代手术后的放、化疗的可行性。 结果： (1)制备了合格的实验材料：对小儿肾母细胞瘤细胞进行了成功的原代培养，建 立了细胞系用于实验研究；克隆了WTI基因部分片段的原核表达质粒，表达并纯化了 蛋白，免疫家兔，采集血清制备了针对WTI的多克隆抗体。 究的对象。 (3)构建了含有／{LA-A*2402的DNA疫苗，双酶切和测序结果证明构建成功。 双酶切和测序结果证明构建成功。运用杆状病毒表达系统对偶联的蛋白进行表达，WB 和电镜检测证明目的蛋白的表达。 疫苗作为对照，结果表明以VLP为呈现载体的新型疫苗免疫小鼠产生了有效的特异性 体液免疫和细胞免疫。抗体亚型分类表明特异性IgG