小熊猫成纤维细系的建立、冷冻保存及异种重构胚构建.pdf

中文摘要 小熊猫是一种濒危野生动物，其进化史在高等肉食类类熊科动物的进化中扮演着 重要的角色，其在动物分类学、系统进化学及生态学等领域都具有十分重要的研究价 值。 为了在细胞水平上长期保存小熊猫这一珍稀物种，同时也为构建小熊猫异种克隆 胚提供供体细胞，本研究采集一5岁雌性小熊猫耳组织，以低糖DMEM为基础液， 块培养法培养小熊猫成纤维细胞到10代；同时在基础培养液中添加20％FBS、8％ 冻程序，对小熊猫成纤维细胞进行了冷冻保存。本研究成功的建立了小熊猫成纤维细 胞系，观察结果表明细胞形态与生长发育情况良好；冷冻保存的第三代细胞解冻后再 培养，其生长曲线符合贴壁细胞的生长规律，培养至96h时，细胞贴壁率达到100％。 为获得构建小熊猫异种重构胚所需的卵母细胞，本研究采用超数排卵技术对日本 大耳兔进行超数排卵，并比较了不同超数排卵方案的效果。结果表明，四种不同剂量 组合的“eCG肌肉注射+hCG静脉注射”的兔超数排卵方案的平均获卵数差异显著， 120IU、hcG180IU 而获得的可用卵数(MII期卵母细胞)差异不显著，其中以eCG 超排效果最好，平均可获卵1