布鲁氏菌外膜蛋的原核表达和鉴定.pdfVIP

摘要 布鲁氏菌外膜蛋白位于细菌细胞膜的最外层，部分外膜蛋白具有免疫原性和抗原保护作用． 本研究的耳的是克隆并表达马尔他布鲁氏菌部分外膜蛋白，并检测所表达外膜蛋白的免疫原性． 通过分析布鲁氏菌的膜相关蛋白，从中选出27个分泌蛋白和跨膜蛋白，利用PCP．扩增方法获得目 的基因，凝胶回收试剂盒回收纯化目的片段，然后与酶切回收的表达载体pGEX--4T-2连接构建重 组表达质粒，转化BL21感受态细胞，并通过酶切分析，PCR扩增和序列测定分析鉴定重组质粒， 结果表明成功构建25个重组表达载体，成功转化并获得22个转化菌株，而且重组质粒中携带的目 的基因编码框完全正确。将构建好的融合表达载体在不同浓度的IPTG诱导下在大肠杆菌BL21中 进行表达，通过不断改变诱导时机和诱导温度等条件，共成功诱导表达16个目的蛋白。用野外牛 阳性血清进行Western-Blot免疫印迹分析，7个蛋白能够表现出程度不同程度的阳性反应，表明 该7个蛋白具有一定的反应原性。该研究为进一步筛选布鲁氏菌病免疫诊断抗原以及蛋白功能研 究奠定了基础。 关键词：布鲁氏菌；外膜蛋白基因；表达；免疫原性 ABSTRACT