抗猪免疫球蛋白克隆抗体的制备与鉴定.pdf

中文摘要 猪传染性疾病给我国的养殖业带来巨大的危害。传统的血清学检测方法难以 了解猪群的早期发病情况，同时也无法区分抗体性质，影响了诊断传染病的准确 性。随着我国规模化养猪业的快速发展，深入研究这些疾病免疫特点，提高免疫 监测和诊断能力，对预防该类传染性疾病已迫在眉睫。研制猪免疫球蛋白的单克 隆抗体，对于进一步研究猪传染性疾病具有十分重要的现实意义。 本文主要研究了抗猪免疫球蛋白单克隆抗体的制备和鉴定。首先，采用饱和 G一200柱层析法从猪血清中获得IgM和IgG，经SDS-- 硫酸铵盐析和Sephadex IgG浓度，分别为O，7mg／mL和2mg／mL。 其次，采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，两组方法分别建立并优化 后得出以下最佳反应条件。猪IgM包被的间接ELISA筛选方法：抗原包被量为 的稀释度为1：20000。 最后，用纯化后的猪IgG，采用常规免疫法免疫6-8周龄雌性BABL／c小鼠。 50％ 取三次免疫后的小鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞按10：1混合，用lmL PEG3000进行