山羊blg调控列及cmv增强子指导人胰岛素原基因在细胞和小鼠中表达.pdf

山羊BLG调控序列及GMV增强子指导 人胰岛素原基因在细胞和小鼠中表达 摘要 I糖尿病是一种以胰岛素缺乏及高血糖为主要特征的自身免疫性疾病。目前 治疗除注射外源性胰岛素外，尚无其他切实有效的方法。近年来，随着转基因技 术的发展，利用转基因技术生产人胰岛素的方法是目前研究的热点。 本实验室已经用人胰岛素原基因组DNA与山羊乳蛋白调控序列、增强子序列 以及新霉素抗性基因构建了人胰岛素原基因乳腺特异性表达载体BICl3。本课题利 用该表达载体在细胞和动物水平上的表达特性，来验证其在乳腺生物反应器上生 产的可行性。 本试验采用电穿孔方法将人胰岛素原基因乳腺特异性表达载体片段导入奶山 G418的筛选培养液筛选培养两周，得到有抗性的 羊乳腺上皮细胞，经含4001．tg／ml 细胞株。挑取单克隆株进行扩大培养后。提取其细胞基因组，经PCR检测后，对阳 性细胞株用催乳素诱导表达，48小时后提取细胞诱导液，用ELISA法检测诱导液 中的胰岛素原。结果获得6株表达的阳性细胞株。 本试验采用显微注射的方法将人胰岛素原乳腺特异性表达载体片段注射入小 鼠受精卵的雄原核，对出生的小鼠经P