氧氟沙星与二氟星的抗体制备及elisa方法建立.pdfVIP

摘要 体蛋白偶联合成了四种人工抗原。用合成的免疫原免疫长耳白兔，制备出高效价 混免血清为核心建立了检测氧氟沙星的间接竞争酶联免疫吸附测定法(Ci．ELISA 法)；并分别以抗DIF血清和混免血清为核心建立了检测二氟沙星的Ci．ELISA法。 1．二氟沙星和氧氟沙星人工抗原的合成及鉴定 采用碳二亚胺法，将氧氟沙星分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BsA)和卵清 白蛋白(OvA)偶联，同样将二氟沙星分别与BSA和OVA偶联，制备出四种人工 彻底透析的人工抗原溶液与FeCl3反应后出现不同程度的橙黄色且略显浑浊，透 析外液、BSA溶液和OVA溶液则呈现浅黄色，说明透析内液中存在大量连接在载 体蛋白上的二氟沙星或氧氟沙星，由此可初步推断二氟沙星和氧氟沙星与载体蛋 I刍BSA和O、A的交联成功。紫外扫描图谱显示人工抗原的最大吸收峰即不同于载 体，也不同于半抗原，另外人工抗原的紫外扫描图谱还显示有半抗原的特征性吸 收峰出现，进一步说明交联反应成功。用紫外光谱法计算出OFL．BSA、OFL．OVA、 2．抗体制备与ELISA工作浓度的测定 耳白兔，制各出了三种抗血清：抗DIF血清、抗OFL血清、混免血清(抗DIF和 用抗DIF血清和混免血清分别建立检测DIF的Ci．ELISA法时，包被抗原 作浓度分别为