弓形虫组织蛋白b缺失株构建及部分生物学特性研究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………………………………I 英文摘要…………………………………………………………………………………………．III l引言………………………………………………………………………………………………1 1．1弓形虫及弓形虫病…………………………………………………………………………1 1．1．1弓形虫的流行病学……………………………………………………………………．1 1．1．2弓形虫病的危害………………………………………………………………………．1 1．1．3弓形虫病的治疗………………………………………………………………………．2 1．2寄生虫半胱氨酸蛋白酶……………………………………………………………………2 1．2．1半胱氨酸蛋白酶家族分类……………………………………………………………．2 1．2．2寄生虫半胱氨酸蛋白酶的生物学功能………………………………………………．2 1．2．3弓形虫组织蛋白酶B(TgCPB)……………………………………………………．．3 1．3基因敲除……………………………………………………………………………………4 1．3．1基因敲除技术的概念及原理…………………………………………………………．4 1．3．2基因敲除技术的方法…………………………………………………………………，4 1．3．3基因敲除技术的应用…………………………………………………………………．4 1．4研究的目的和意义…………………………………………………………………………5 2材料与方法………………………………………………………………………………………6 2．1材料………………………………………………………………………………………………………………………．6 2．1．1虫株与菌种……………………………………………………………………………．6 2．1．2实验动物………………………………………………………………………………．6 2．1．3主要试剂………………………………………………………………………………．6 2．1．4主要仪器设备…………………………………………………………………………．6 2．1．5主要溶液的配制………………………………………………………………………，7 2．1．6主要应用软件…………………………………………………………………………．9 2．2方法………………………………………………………………………………………………………………………．9 2．2．2弓形虫TgCPB缺失株的筛选及鉴定………………………………………………．13 8 2．2．3弓形虫TgCPB生物学特性分析……………………………………………………．1 3结果……………………………………………………………………………………………………………………………24 3．1弓形虫组织蛋白酶B缺失载体构建……………………………………………………．．24 3．1．1 51一UTR及3’．UTR……………………………24 PCR方法扩增弓形虫组织蛋白酶B 东北农业大学农学硕士学位论文 3．1．2 3．1．3 5’UTR—T_pBluesc啷t质粒酶切鉴定…………………………………………………．25 3．1．4 3．1．5 3．1．6 3．2TgCPB缺失株的鉴定……………………………………………………………………．．28 3．2．1PCR鉴定………………………………………………………………………………28 3．2．2 South锄-blotting鉴定…………………………………………………………………28 3．3TgCPB基因生物学特性研究……………………………………………………………．．29 3．3．1增殖实验………………………………………………………………………………29 3．3．2粘附实验………………………………………………………………………………3l