斑点叉尾鮰nl家族几个免疫相关基团的表达分析及染色体定位.pdfVIP

斑点叉尾触NLR家族几个免疫相关基因 的表达分析及染色体定位 捅 要 NLRs(nucleotide_bindingdomain，1eucine—richrepeatcontainingreceptors)是 病原识别受体家族(pathogenrecognitionrec印tors，PI水s)的重要成员，PRR通 molecular pattems，PAMs) 过感知与病原体相关的分子模式(pathogen—associated 来识别入侵的病原体，它们在先天免疫中起着重要的作用。近年来，有学者对斑 点叉尾鲴(尼f口，“，．甜s (凰加口，出把f肠fcf口7沙f)诱导下各个基因的表达情况，然而在斑点叉尾鲴的养殖 实践中除了爱德华氏菌外，还有多种病原都给斑点叉尾鲴养殖业带来了巨大的损 失，本文选取了最具代表性的几种细菌和病毒——迟钝爱德华氏菌(尉wa胁zP妇 fd捆a)、嗜水气单随菌∽eromonns Catfish 和斑点叉尾鲴呼肠孤病毒(ChaI】Ilel Reovims，CCRV)分别 Hemomlage real—time 对斑点叉尾鲴进行感染实验，通过实时定量PCR(quantitativePcR， qRl、．PCR)方法检测了NOD亚家族中各个基因在健康的斑点叉尾鲴的12种不同 组织中以及在感染几种病原后的肝脏、脾脏、肠和头肾中的时空表达特征，探讨 它们与斑点叉尾鲴先天免疫反应的关系。同时，本文还通过荧光原位杂交技术对 NODl和NOD2两个重要基因进行了染色体定位研究，以便从染色体水平更加直 此外， 观的进一步了解这些基因，为将来对NODs基因的深入研究打下基础。 本文还对斑点叉尾鲴BIRC7基因进行了克隆和表达分析，首先用RACE方法克 不同组织中以及在分别感染迟钝爱德华氏菌、链球菌和斑点叉尾蛔呼肠孤病毒后 在头。肾、肝脏和脾脏中的表达情况。本研究的主要结果如下： 1斑点叉尾鲴NODs基因在细菌和病毒感染后的表达特征 所有的NODs基因在健康鱼体的12种组织中(脏、脾脏、肠、头肾、血、 后。肾、胃、心脏、脑、鳃、肌肉和皮肤)持续而广泛的表达，其中在血、肌肉、 鳃、心脏中的表达量较高。除了在感染嗜水气单胞菌和斑点叉尾鲴呼肠孤病毒后 在脾脏中的表达与对照组相比呈现下调外，感染所有的四种病原后，NODl， NOD2，NLRC3，NLRC5在肠、肝脏和头。肾中都表现为大幅度的上调表达。 NLRXl的表达在肠、肝脏和头肾中上升而在脾脏中下降。在四种不同的病原中， 革兰氏阳性菌链球菌最能引起NODs各基因的上调表达，且上升幅度最大，而斑 点叉尾鲴呼肠孤病毒只能引起轻微的上调表达。从不同的组织来看，NODs在肝 脏中的表达变化最大，其次是头。肾，肠，最后是脾脏。将NOD亚家族的五种基 因进行比较，结果发现NOD2的表达上调最为强烈，而NLRXl相对来说变化幅 度不大。所有的这些数据都说明，NODs在参与斑点又尾鲴先天免疫反应过程中 表现出了明显的组织特异性和病原特异性，同时各基因在受到细菌和病毒诱导后 有着相似的表达模式，表明了它们在抗细菌和病毒过程中具有协同作用，为 NODs基因在斑点叉尾鲴先天免疫中的重要性增添了有力的证据。 2斑点叉尾鲴BIRC7的克隆和感染不同病原后的表达分析 686 斑点叉尾鲴BIRC7基因(Cc肼RC7)cDNA序列全长1 bp(GellBank登 ol 录号为JQ268267)，包括1