高效液相色谱分析方法的建立解析.ppt

荧光检测器的应用 环境中的污染物 多环芳烃(PAH)，多酚，氨基甲酸酯等 食品、饮料 食品中的毒素；例如：黄曲霉毒素 染料 维生素及衍生氨基酸 生物技术及制药 黄曲霉毒素 多环芳烃（PAH） 维生素 荧光检测器的优点 选择性提高 灵敏度提高（在 pg/fg 范围） 低背景技术 mV -0.10 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 Minutes 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 6.894 9.639 MDA及MDMA 柱上200pg Excitation ?=280 Emission ?=360 荧光检测器的缺点 不是所有化合物都有荧光，需要衍生； 检测器对溶解气体及其他淬灭物质（如甲醇）敏感； Ex及Em的最佳?，易受温度、溶剂的极性和粘度、溶剂的pH值及样品浓度影响； 多数仪器的批次间差异较大，同一型号的不同荧光检测器会得到不同的结果。 溶剂中溶解的气体对响应值的影响实例 Minutes Column - PAH Column @ 27o C Eluent A: Water Eluent B: Acetonitrile Gradient: 60% B to 100% B using curve 9 in 12 minutes Hold 11 minutes Back to initial conditions Flow Rate 1.2 ml/min Injection: 20ul Time programmed wavelength changes 20.5 21.0 22.0 1000 MV 充分脱气 未充分脱气 Fluorescence Detector 1 2 3 1. Benzo(b)flouranthene - 400 ppb 2. Benzo(k)fluoranthene - 200 ppb 3. Benzo(a)pyrene - 200 ppb 蒸发光散射（Evaporative Light Scattering）检测器 用氮气把流动相吹成细雾状液滴； 流动相的液滴通过一个预加热的腔体后被蒸发掉； 蒸发的溶剂被除去； 溶质的挥发性小于流动相，因此产生颗粒束并与入射光相交，产生散射； 散射光在光电倍增管（PMT）上产生信号； PMT的输出与溶质的量呈比例关系 蒸发光散射检测器原理示意图 Evaporative Light Scattering 简称：ELSD 入射光 样品颗粒 散射光 光电倍增管 ELSD － 优点及应用领域 通用型检测器： 一般情况下，比流动相挥发性小的且能产生颗粒的物质都能被检测 可以作梯度洗脱；检测下限可到纳克级水平 对环境条件不敏感；可以使用有强紫外吸收的溶剂作流动相 应用领域： 碳水化合物 油脂及脂肪酸 未衍生的氨基酸 制药行业 表面活性剂 天然产物 ELSD － 缺点 不能使用含不挥发性成分的流动相（例如：磷酸盐）； 要求使用雾化气源（一般是氮气，也可使用压缩空气）； 当色谱条件改变时，雾化及除溶剂的参数需要重新优化； 破坏性技术； 蒸发出的溶剂要排到室外； 对挥发性化合物的检测不理想，（不出峰）； 一般得到的是非线性校正曲线； 某些化合物的检测灵敏度不如其他检测器 光电二极管矩阵（Photo Diode Array） 检测器 Photo Diode Array 简称：PDA或DAD (Diode Array detector) 入射光 流通池 光栅 光电二极管矩阵 PDA检测器 － 特点 三维水平的吸光度检测器 二极管矩阵检测器是在1982年首度出现的 需要相应的软件进行数据的分析 PDA检测器的用途及要求 光电二极管检测器可以提供许多有用的功能 光谱信息 色谱峰纯度 谱库拟合 像其他所有的UV/Vis检测器一样，需要： 高的信噪比；好的线性 另外；还需要： 光学分辨率 光谱灵敏度及光谱分析软件 什么情况下使用HPLC？ 1、对分析结果、测定速度和效率的要求 准确度要求：准确定量（RSD5％） 测定速度和效率：快速，单一或多组分测定。 2、样品情况 样品的复杂情况：HPLC适用于复杂样品的分析， 如中药分析、环境分析、体内药 物分析、临床药物分析等。 HPLC方法建立的前期工作 样品情况的了解： 样品的种类（来源）：植物（中草药）、合成中间体、生物样品（血液、尿液、组织匀浆等）…… 样品的种类决定了样品的复杂程度（基质影响），从而可初步判定测定的难易程度并且为分析方法的确立设计一个大致的方向。 待测成分的性质：极性、水溶性