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y6 4533 4 AT细胞辐射敏感性的研究 中文摘要 中文摘要 生物有机体的辐射敏感性是影响电离辐射生物效应 的一个重要因素。不同种系、不同个体、不同组织和细 胞、甚至不同生物大分子，对电离辐射的敏感性差异很 大，即同一剂量的同种射线在相同条件下照射不同机体、 组织、细胞或生物大分子时，产生的辐射损伤效应或者 刺激效应可能截然不同。研究表明，细胞辐射敏感性主 要与该细胞的DNA含量、细胞种类及其生化结构、细胞 所处的细胞周期时相、细胞所处内外环境、细胞增殖速 率、细胞对辐射损伤的修复能力和细胞清除自由基的能 力等因素有关。最近二十年，随着临床肿瘤放疗和辐射 防护学科的发展，细胞辐射敏感性研究逐渐成为放射生 物学领域的热点。 a 毛细血管扩张一运动共济失调症(ataXi Te ectasi langi a，AT)是一种常染色体隐性遗传病，该 病患者具有进行性小脑退化、早熟和肿瘤高发病率等多 种特殊的临床表现及与临床表现相一致的高辐射敏感 性、免疫缺陷、基因组不稳定性等特点。培养的AT细胞 缺少正常的辐射诱发的细胞周期关卡，并出现与临床表 现相一致的特征性表型。AT的缺陷性表型与AT细胞染 1 色体1 细胞对某种DNA损伤反应的信号传导系统中的关键蛋 白。蛋白序列分析显示，ATM属于大真核蛋白家族，它调 控细胞对DNA损伤的反应，包括DNA损伤的修复、基因重 I AT细胞辐射敏感性的研究 中文摘要 组、细胞凋亡和细胞周期关卡等。 目的：本课题通过测定AT细胞染色体畸变率、细胞 周期各时相细胞的份额、细胞凋亡率、DNA双链断裂及 其修复程度、细胞培养介质中超氧阴离子自由基浓度、 细胞3H—TdR掺入率，与正常成纤维细胞6M作比较来研 究电离辐射对AT细胞增殖、细胞周期分布、细胞凋亡、 染色体畸变、细胞释放超氧阴离子自由基及细胞DNA双 链断裂及其修复的影响，对AT细胞辐射敏感性的机理进 行初步探讨，进而为AT病研究提供生物学依据。 方法：(1)细胞培养：将AT和GM两种成纤维细胞 1640培养基， 接种于含l5％小牛血清的DMEM或RPMI 3 y 7℃、5％C0。条件下传代培养。(2)细胞照射：应用”co n；(3) 源对细胞进行不同剂量照射，剂量率为1Gy／mi Gy 染色体畸变分析：常规染色体制片，对0，1，2，3，4 剂量组分别观察400一1200个中期分裂相，计数其中出 现的双着丝粒和着丝粒环；(4)细胞周期：根据细胞中 DNA含量，应用流式细胞仪分析G。／G。、s和G：／M细胞所 占的份额；(5)细胞凋亡检测：用酚、氯仿及异戊醇法 抽提DNA，琼脂糖电泳分离DNA片断，观察细胞凋亡过 程中产生的DNA断片；根据细胞膜受照后磷脂酰丝氨酸 nV—FITC S DeteCtion 外翻的特点，以Annexi Ap0Pt0Si Ki t 链断裂与修复：胰蛋白酶消化照后培养不同时间的细胞， 离心清洗后与低熔点琼脂