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Aurora—A激酶在不同类型肺癌中的表达研究 博士研究生：邹丽娟 指导教师：杨佩满 教授 专业名称：病理学与病理生理学 摘 要 中心体相关蛋白的研究是继细胞周期、信号传导、细胞凋亡之后的又一个研 究热点。众所周知，在有丝分裂过程中，中心体是确保纺锤体两极形成，染色体 平均分配到子细胞的主要细胞器，其正常复制对于维持基因组的稳定起着至关重 要的作用。 Amora．A是近年发现调节细胞周期的丝／苏氨酸激酶家族成员之一，与中心体 成熟和染色体分裂有关，在人类多种肿瘤中表现为扩增和过表达，已被确认是一 种新的癌基因。研究发现其对细胞有丝分裂的正常进行发挥重要的作用。它可引 起中心体扩增，染色体不稳定，非整倍体形成而导致肿瘤的发生。 多项研究发现，Aurora-AmRNA和蛋白质水平在乳腺癌、胃癌、肝癌、食管 癌、膀胱癌以及胰腺癌等多种人类恶性肿瘤中呈高表达。其过表达和活化在早期 的卵巢癌与乳腺癌中被经常检测到。抑制Amora-A激酶活性，可有效地阻断细胞 的生长、增殖，引起肿瘤细胞的凋亡。提示，人类可通过研究抑制Aurora-A基因， 限制肿瘤的发生与发展，为恶性肿瘤的治疗提供一个新的方法。 近年柬，肺癌的发病率和死亡率呈全球上升趋势。在许多国家肺癌已是最常 见的恶性肿瘤，占发病率与死亡原因的第一位。由于目前诊断技术与治疗手段的 限制，多数患者就诊时已为晚期。因此改进肺癌的诊断技术，提高治疗的效果， 已经成为近期全世界肿瘤研究领域的重中之重。我国也把肺癌列为全国重点公关 课题。尽管世界各国的专家学者进行了大量的临床和基础研究，取得了许多重大 进展。但距离人类真正控制和战胜肺癌还有一定距离。到目前为止，提高肺癌疗 效的关键还是在于早期发现、早期诊断、早期治疗。因此，寻求新的肿瘤标记物 与治疗靶点已是肺癌研究的重点。 检索文献，尽管近几年Aurora．A基因已成为肿瘤研究的热点，但在肺癌中的 表达研究鲜有报道，特别在临床研究方面至今未见报道。为了解该基因在肺癌细 胞系与组织中的表达情况，以及对肺癌发生发展的影响。本实验从以下方面进行 ·l‘ 株中高表达，及其表达水平与ONA非整倍体的关系。②为了解Aurora—A在临床肺 癌组织中的表达情况，我们利用RT—PCR、Western与免疫组化方法对临床肺癌的 组织标本进行了Aurora-AmRNA与蛋白水平的检测，探讨其表达水平与临床的相 关性。③为了研究Aurora—A基因在肿瘤中的作用，我们选择鼠卵巢CHO细胞系， Aurora—A在细胞中的定位以及对中心体复制的影响。 本实验在对三种肺癌细胞系的半定量RT—PCR检测结果显示，A549(肺腺癌)、 肺癌细胞与正常肺组织比较Aurora-AmRNA均高表达；其表达高低依次为A549细 胞，PG细胞， NCI-H460细胞。而Westernblot检测三种肺癌细胞Aurora—A蛋白 同样是高表达，与对照的二倍体肿上皮细胞比较，三神肺癌细胞均出现Aurora—A 与蛋白水平均高表达，其表达水平的高低相一致。而每种细胞系在mRNA及蛋自表 达水平上的差异，表明这一基因在转录及翻译水平上可能存在不同的调节机制。 不清楚。 同样DNA含量的检测结果发现，三种细胞株在二倍体、四倍体与异倍体的细 与多倍体细胞比例关系更密切。本实验的研究发现：多倍体(4N)的细胞比例中， 种细胞的差别具有统计学意义(仄O．01)。这一结果与三种细胞Aurora—A表达水 平的高低相一致。由此漉明，Aurora—A表达强弱与肺癌细胞多倍体(4N)的比例高 低具有相关性，提示Aurora—A基因的过表达可通过致染色体的非整倍性导致肿瘤 的发生。 本研究Aurora—A在肺癌细胞系中的高表达与以往的肿瘤细胞株研究结果一 ·2‘ Aurora～A 致，Brown等曾对Aurora—A基因在肿瘤细胞系中研究发现，mRNA在 乳腺癌、结肠癌、6U列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、胃癌等细胞系中均过度表 定性与非整倍性而导致肿瘤的发生。 另有研究报告在某些恶性肿瘤组织中Aurora．A也