bca3调控巨细胞功能的研究.pdf

ROLES OF BCA3 IN REGULATING THE FUNCTION OF MACROPHAGES A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Hu Meiyun Supervisor: Prof. Ma Yuanfang Prof.Lv Ming April, 2013 摘 要 背 景 乳腺癌相关基因BCA3(breast cancer-associated gene)是2003 年发现在乳腺癌和前列 腺癌细胞中高表达的一个新基因。BCA3 蛋白富含脯氨酸，具有多个蛋白结合位点和磷 酸化位点。BCA3 可以通过与RING1 竞争结合KyoT2 ，拮抗RING1 对RBP-J 转录活性 的抑制，进而调控Notch 信号通路。BCA3 也可以与PKA 相互作用，故而被称为PKA 相互作用蛋白（PKA-interacting protein ，AKIP1 ）；BCA3 与PKA 催化亚基结合，通过 影响p65 磷酸化调节NF κB 的转录活性。BCA3 参与这些重要信号通路的调控，提示它 可能在多种细胞生物学活性中发挥一定的调节作用。研究提示，BCA3 可以通过与TAp73 相互作用，借助线粒体途径促进放疗引起的宫颈癌细胞凋亡，增加宫颈癌细胞对放疗的 敏感性。BCA3 与Rac1 相互作用能显著减弱CSF-1 诱导的破骨细胞的迁移能力。破骨 细胞是一类分布在骨组织中的巨噬细胞，这提示BCA3 可能参与调节巨噬细胞的功能。 巨噬细胞是机体的重要免疫细胞，大量研究表明巨噬细胞功能异常与自身免疫病、肿瘤 等多种疾病密切相关。因此，探讨肿瘤相关基因BCA3 在巨噬细胞以及免疫系统中的生 物学功能对进一步阐述免疫应答机制以及多种疾病的治疗有重要指导意义。 目 的 探讨BCA3 对巨噬细胞功能的调控及其机制。 方 法 通过Western blot 的方法检测BCA3 在多种免疫细胞和免疫组织中的表达；体外诱 导小鼠骨髓细胞为巨噬细胞，Western blot 的方法检测在巨噬细胞分化过程中BCA3 蛋 白表达量的变化；以RAW264.7 和U937 为细胞模型，借助慢病毒感染的方法敲低BCA3 的表达，分析细胞生物学功能改变，主要关注对炎症刺激的反应性，包括吞噬功能、分 泌细胞因子、细胞表面分子等的变化；利用LPS 注射小鼠腹腔构建炎症动物模型，探索 炎症条件下，巨噬细胞功能与BCA3 的关系。通过Western blot 等方法探讨巨噬细胞中 BCA3 对NF κB 转录活性的影响，初步分析BCA3 参与调控巨噬细胞功能的潜在机制； 借助基因芯片技术，分析BCA3 基因参与生物学活性的信号通路网络。 I 结 果 BCA3 在多种免疫相关细胞系和免疫组织中高表达；随着巨噬细胞逐步分化成熟， BCA3 蛋白表达量显著上调。在RAW264.7 和U937 细胞模型中，敲低BCA3 显著增强 LPS 等介导的炎症反应：吞噬功能增强；分泌炎性因子IL-6、TNF α增加；表达IL-8、 IL-12、IL-10 mRNA 上调；特异性的细胞表面标志分子CD14、CD11b、CD86 等表达增 强。WB 结果提示，敲低BCA3 后，p65 组成性表达上调，在LPS 等炎性因子刺激下， p65 磷酸化增强。小鼠炎症模型实验结果提示：在炎症初