cyclind、cdk4及p16在糖尿病早期肾脏细胞的表达.pdfVIP

±查塑蓬 —___——_____H___——___—____-●—__———_H--___———____—__-————_——一一 一 inDl、CDK4及p16在糖尿病早期肾Jl焘缨艟的 Cyci 表达 摘 簧 目的：糖尿病肾病(EIN)的病理变化较为复杂，肾 脏经历了早期肥大和晚期硬化两个主要的病理变化。早期 肾脏肥大又经历了肾脏细胞增生(细胞数量增多)和细胞 肥大(细胞体积增大、两个过程。一般认为肾脏细胞(包 括肾小球和肾小管细胞)在经历短暂的增生期后即转为细 胞肥大期。肾脏肥大与晚期肾小球硬化和肾小管间质纤维 化关系密切。但是，引起肾脏这些病理变化的机制并不十 分清楚。多数研究表明许多因素协同作用参与DN的发病。 高血糖，血流动力学障碍，各种生长因子(如转化生长慰 子。B)，血管活性物质(如血镣紧张索。11)等均与其发病 有关。 细胞周期蛋白的作用近年来受到广泛重视。缨胞周期 蛋自作为缨胞周期调节的重要因子，在缨艟静生长调控中 起重要作用。多攀孥缎飚外信号最终均逶过激活残捧铺缩戆 周期蟹皇鳇表达嚣发挥作羯。但是，细胞周期蛋自在糖尿 瘸性肾病发生发展过程中，尤其在早期肾脏细耱增生及腮 大除羧的变化及英作用尚无详细研究报道，阐明这望变化 和作用将有助予糖藤瘸肾病的防治。本研究应溺大鼠耱尿 瘸模登，溉察细胞周期素DI(cyclinDl)，细胞周期索依 赖性激酶4(CDK4)及细胞周期蛋白激酶抑制荆p16在 糖尿病(DM)早期肾脏细胞的表达，试图阐明其在DM 中文摘要 早期肾脏细胞增生和由增生转为肥大过程中的作用。 方法：用链脲佐菌素(STZ)诱发实验性糖尿病模型。 将雄性SpragueDawley(SD)大鼠随机分为A组(正常 对照组)和B组(糖尿病组)。B组大鼠腹腔单次注射STZ 4．5，0．1mol／L枸橼酸钠缓冲液配制)， 65mg／kg(STZ用pH 对照组只注射相同体积的枸橼酸钠缓冲液。24小时后， 血糖≥16．7mol／L，尿糖+++～++++确认为糖尿病模型成功。 分别在注射STZ后第5天、15天、30天各麻醉动物6只， 取出肾脏进行以下观察：1．测定肾重、体重，以计算肾 重／体重比。2．组织经固定后行HE染色，光镜下观察肾 脏的病理改变。3．PAS染色，光镜下观察系膜基质和基 底膜增厚情况。4．病理图像分析系统(}DIAS．1000)测 定肾小球、肾小管直径。5．免疫组织化学方法检测肾脏 细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、CDK4、p16在蛋白水 平的表达，其中CDK4以阳性细胞率作为比较指标。6．流 式细胞术检测肾脏皮质细胞cyclinDl、p16蛋白表达，以 荧光指数(FI)表示所测指标的相对含量，FII．0为阳性 表达。7．原位杂交方法检测肾脏细胞中cyclinDl在mRNA 水平的表达。8．统计学处理，所有数据均用i±S表示， 组间及组内数据比较用t检验，数据统计应用SPSS统计 软件完成。 结果：l糖尿病组大鼠在5天时肾重／体重即显著高 于正常对照组。15天和30天时，肾重／体重不仅显著高于 正常对照组，而且较5天也有显著增高。 2光镜下观察，糖尿病组5天、15天时肾小球、肾小管 均未见明显病变。30天时，肾小球、肾小管体积增大。 中文摘要 实验过程中，未觅基底膜增潭和系貘基履增多。 3病理图像分析系统显示，糖艨病维大鬣肾小球壹径 m】 f(4．91±0．21)pm】、肾小管直径【(1．468±0．34)p m】、 在5天时与磁常对照组肾小球直径【(4．38±0．17)ix 肾小管直径【(1．12±0．53)弘m】相沈无显著差异。15天时， m，肾小管直径 糖尿瘸组肾小球直径为(6．47±0．16)n 为(1．98±0．15)u