e.colida抗肿瘤免疫的动态实验研究.pdf

E.coliDNA抗肿瘤免疫 的动声实验研究 硕士研究生:史丽滨 指 导 教师:张卓然教授 专 业 名称:病原生物学 摘 要 肿瘤逃脱宿主免疫监视，宿主免疫低下，是肿瘤得以生长发展的 主要原因准用安全有效的肿瘤免疫方法，调动机体内在的VLM中瘤能 力来战胜肿瘤是众多学者关注的热点。DNA是一种带有遗传信息的大 分子，但近来证据表明，不同物种来源的DNA免疫原性不同，细菌DNA 能激活机体免疫系统，并具有免疫调节作用。我们以前的实验已经证 明:大肠埃希菌DNA(E.coliDNA)具有很强的抑瘤作用，但对肿瘤 细胞无直接细胞毒作用，其表现的抑瘤作用主要是由DNA激活荷瘤小 鼠的免疫功能所引起的。在此基础上，本实验进行了E.coliDNA抗肿 瘤免疫的动态实验研究，进一步揭示了E.coliDNA对荷瘤小鼠免疫功 能的动态调节作用及荷瘤机体免疫功能的动态变化。55只BALB/。小 鼠，其中5只为正常对照小鼠，其余的50只小鼠全部荷瘤，荷瘤后 随机分成10组，5组为TES(Tris,EDTA,NaCl组成，是DNA溶解液) 对照组，5组为E.coliDNA治疗组。荷瘤后第四天起，分别于对照组 和治疗组小鼠皮下注射TES(0.1M)和E.coliDNA (100ug/ml)0.3 ml/只，隔日一次，共五次。分别于注射1次，3次，5次后24小时 及5次后5天 ，9天 (即相当于荷瘪后第5天，9天，13天，17天和 21天)各处死一组TES对照组和E.coliDNA治疗组小鼠。取瘤组织称 重，中性福尔马林固定，制备病理切片，取脾，测NK细胞杀伤活性， 取腹腔渗出液，测MCI)细胞杀伤活性，收集血清，测量IL-12,N0,TNF-(x 含量。正常小鼠同样取脾，腹腔渗出液，收集血清，测量指标同上。 结果如下: 1.E.coliDNA体内抑瘤作用的动态变化:E.coliDNA皮下注射5 次后抑瘤作用明显，抑瘤率达47.07%，而且抑瘤作用持久，于注射5 次后5天和9天，其抑瘤率可达42.29%和51.44%。从病理切片上可 以看到，TES对照组中，肿瘤细胞生长旺盛，荷瘤中期即出现骨骼肌 被浸润现象，且浸润程度不断加深，坏死出现较晚，且坏死面积较小， 坏死灶多位于瘤组织中央;而相应的E.coliDNA治疗组中，治疗早期 即出现肿瘤细胞坏死，而且坏死面积不断扩大，可接近整个瘤组织， 坏死灶分布广，周边有大t琳巴细胞授润，未见骨骼肌被浸润现象。 2.E.coliDNA对体内NK/1145细胞杀伤活性影响的动态变化: E.coliDNA治疗早期，NK/细胞杀伤活性(%)(55.5411.23/56.87 11.05)显若高于正常对照组 (46.4512.53/48.6412.76)(P0.01), 虽然相应的TES对照组中NK/11.细胞杀伤活性 (52.0212.95/ 52.7011.28)，也离于正常对照组Wo.06),但仍低于相应的E.coli DNA治疗组 (P0.06):在E.coliDNA泊疗期间，NK/11O细胞杀伤活 (55.7911.75/56.9811.10;53.7410.79/55.8530.83)雄持于治疗早 期的较高水平，而相应的TES对服组中，NK/W细施杀伤活性 (46.0711.30/47.5411.79;37.5810.99/41.2712.12)却逐渐下 降;在E.coliDNA治疗后一段时间内，NK/1F.细魔杀伤活性 ((47.43 11.06/47.6711.01)仍可雄持于正常水平范围之内(P0.05)，而相 应的TES对照组中，NK/协.细血杀伤活性(29.6611.99/27.28土1.42) 却显若低于正常水平印0.01)。 3.E.coliDNA对血清中细胞因子含f形晌的动态变化:E.coliDNA 一 2. 治疗早期，血清中IL-12含量(ng,/l)(73.45士4.28)，明含量 (州) (60.6012.07)及TNF-a含量 (ng/1)(91.27士2.74)均显著高于正 常小鼠的