fimh蛋白对路细胞tlr4及其相关细胞因子的表达和抗感染作用的影响.pdfVIP

个人简历…………………………………………………………………·58 中文摘要 FimH蛋白对尿路细胞TLR4及其相关细胞因子的表达 和抗感染作用的影响 摘 要 tract 目的：尿路感染(urinary I型 菌毛的顶端蛋白，是细菌感染尿路细胞的关键因素，它能特异地与膀胱表 皮细胞表面的甘露糖糖蛋白结合，诱导宿主细胞局部重排而直接介导 预防细菌性尿路感染的候选靶蛋白。用FimH蛋白免疫动物，可诱导高水 FimH的大肠杆菌发生交叉反应，对尿路感染具有一定的保护作用。我们 以前的研究也得到了相似的结果。 直接与巨噬细胞表面的TLR4结合，通过MyD88依赖的信号通路的激活， 促进TNF．a等细胞因子的产生，提高小鼠腹腔巨噬细胞的抗病毒活性。 也表达于尿路上皮细胞，参与尿路细胞的抗感染作用，且FimH蛋白对尿 路细胞和TLR4的作用还未见研究报道。 本课题旨在研究FimH蛋白对膀胱上皮细胞，肾小管内皮细胞TLR4 表达和相关炎症因子的调节作用，研究FimH蛋白对尿路细胞的抗菌作用 的影响，以及对小鼠膀胱感染模型中炎症反应强度的影响，为进一步研究 FimH蛋白对尿路粘膜固有性免疫的调节作用提供实验依据。 方法： BL．2 转染感受态E．coli 定后，纯化、定量；MTT法检测融合蛋白的细胞毒性；鲎变形细胞溶解 物LPS试剂盒测定LPS含量。 ‘ 中文摘要 肾小管癌上皮A498细胞株和巨噬细胞Thp．1，流式细胞仪检测细胞表面 TLR4的表达变化，应用Real．Time mRNA的表达变化。 共培养2h，洗去细胞外的U30菌，用O．2％的Triton．X100溶解细胞，溶 解液稀释后用LB平板培养过夜，菌落计数，评价FimH蛋白对膀胱细胞 抗菌作用的影响。 5只，连续注射7天后取小鼠膀胱和肾组织， 生理盐水)，100ug／只，每组1 Real-time 表达。 5用U30菌经尿道上行感染小鼠，制备成膀胱感染模型，将FimH蛋 白腹腔注射感染小鼠，共三天，以生理盐水为对照，每组15只，Real—time 胱HE染色观察FimH蛋白作用后膀胱组织炎症侵润程度。 结果： 献报道当FimH蛋白溶液内为LPS 法检测证明当蛋白FimH浓度弋25ug／ml时对细胞无毒性。 后，细胞表面TLR4的表达水平均较空白对照组显著增高(PO．05)。 3 和巨噬细胞TI-IP．124h后Real。time IL．8 mRNA表达与空白对照组和LPS对照组比较 细胞IL．6、TNF．0【、MyD88 ’ 均显著升高(PO．05)。 4U30细菌刺激低、中、高浓度FimH蛋白分别作用的5637细胞显示： 中文摘要 明显。 5 示FimH蛋白作用组小鼠膀胱、肾组织TLR4表达量均高于生理盐水对照 组。 mRNA表 6感染模型小鼠应用FimH蛋白后，膀胱和肾IL．6，TNF．Q 达水平显著高于对照组(尸O．05)。膀胱组织HE染色显示与生理盐水对照 组比较FimH作用组膀胱组织炎细胞浸润减少，粘膜表面平滑、完整。 结论： TLR4的表达。 2FirnH蛋白能促进5637细胞和A498细胞IL．6，IL．8mRNA表达增 显著促进IL．6和TNF一0【mRNA的表达且以MyD88依赖途径。 3FiI出蛋白能显著增强5637细胞对U30细菌的抵抗作用。 4 且